【摘要】：目的:腎癌是泌尿男性生殖系統(tǒng)的常見(jiàn)腫瘤,透明細(xì)胞癌是腎癌的主要病理類(lèi)型。研究發(fā)現(xiàn)14-3-3σ基因在腎癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織。目前腎癌的治療主要依靠外科手術(shù)。有研究表明14-3-3σ在腎癌組織中的表達(dá)量低于癌旁組織,14-3-3σ基因在腎癌組織與癌旁組織的差異性表達(dá)為探索新的腎癌治療方法指引了方向。本文主要研究14-3-3σ基因在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。研究方法:在786-O、769-P和ACHN三種腎癌細(xì)胞系中,通過(guò)RT-PCR、Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)14-3-3σ基因的mRNA和蛋白的內(nèi)源性表達(dá);769-P和ACHN腎癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染14-3-3σsiRNA后,再通過(guò)RT-PCR、Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)769-P、ACHN中14-3-3σ的mRNA和蛋白表達(dá)水平,從而可以間接地反映出14-3-3σsi RNA的敲除效率;769-P、ACHN腎癌細(xì)胞再次轉(zhuǎn)染14-3-3σsiRNA后檢測(cè)腎癌細(xì)胞功能,包括轉(zhuǎn)移與侵襲、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期與凋亡功能實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:RT-PCR結(jié)果顯示769-P腎癌細(xì)胞中14-3-3σ基因mRNA表達(dá)量顯著高于ACHN細(xì)胞系,ACHN細(xì)胞系中14-3-3σ基因mRNA表達(dá)量顯著高于786-O細(xì)胞系。Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示769-P腎癌細(xì)胞中14-3-3σ蛋白表達(dá)量顯著高于ACHN細(xì)胞系,ACHN細(xì)胞中14-3-3σ蛋白表達(dá)量顯著高于786-O細(xì)胞系。769-P和ACHN腎癌細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染siRNA,敲除14-3-3σ基因后,RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染過(guò)14-3-3σsi RNA的769-P和ACHN腎癌細(xì)胞中14-3-3σmRNA的表達(dá)量明顯低于未轉(zhuǎn)染14-3-3σsiRNA組,Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染過(guò)14-3-3σsiRNA的769-P、ACHN腎癌細(xì)胞中14-3-3σ蛋白表達(dá)量明顯低于未轉(zhuǎn)染過(guò)14-3-3σsiRNA的細(xì)胞(P0.05)。轉(zhuǎn)染過(guò)14-3-3σsiRNA的769-P和ACHN細(xì)胞較對(duì)照組的769-P、ACHN細(xì)胞轉(zhuǎn)移與侵襲能力顯著增強(qiáng)。細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示處于細(xì)胞周期G1期的細(xì)胞百分比對(duì)照組顯著高于實(shí)驗(yàn)組,說(shuō)明14-3-3σ基因能使細(xì)胞周期阻滯在G1期。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)顯示對(duì)照組中769-P細(xì)胞的凋亡細(xì)胞百分比是實(shí)驗(yàn)組的3倍,對(duì)照組中ACHN細(xì)胞的凋亡細(xì)胞的凋亡百分比是實(shí)驗(yàn)組的2倍,說(shuō)明敲除14-3-3σ基因后抑制了769-P、ACHN腎癌細(xì)胞凋亡。敲除14-3-3σ基因后769-P和ACHN細(xì)胞的增殖能力較對(duì)照組顯著增強(qiáng)。結(jié)論:14-3-3σ基因能夠在腎癌細(xì)胞中表達(dá),14-3-3σ基因能夠抑制769-P和ACHN腎癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲和細(xì)胞增殖,促進(jìn)腎癌細(xì)胞凋亡,阻滯細(xì)胞周期于細(xì)胞間期。
【圖文】：

圖 1 RT-PCR 檢測(cè) 14-3-3σmRNA 在三種腎癌細(xì)胞中的內(nèi)源性表顯示：769-P 腎癌細(xì)胞系中 14-3-3σmRNA 水平顯著高于 786-O 和 A中 14-3-3σmRNA 高于 786-O 細(xì)胞系。ern Blot 檢測(cè)769-P、786-O、ACHN 三種腎癌細(xì)胞系中圖 2 Western Blot 檢測(cè) 14-3-3σ蛋白在三種腎癌細(xì)胞中的內(nèi)源性表顯示：在 769-P、786-O、ACHN 三種細(xì)胞系內(nèi)均能表達(dá) 14-3-3σ蛋

圖 1 RT-PCR 檢測(cè) 14-3-3σmRNA 在三種腎癌細(xì)胞中的內(nèi)源性表顯示：769-P 腎癌細(xì)胞系中 14-3-3σmRNA 水平顯著高于 786-O 和 中 14-3-3σmRNA 高于 786-O 細(xì)胞系。rn Blot 檢測(cè)769-P、786-O、ACHN 三種腎癌細(xì)胞系中
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R737.11

【參考文獻(xiàn)】

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1 Anne BENZINGER, Grzegorz M. POPOWICZ, Joma K. JOY,Sudipta MAJUMDAR,Tad A. HOLAK,Heiko HERMEKING;The crystal structure of the non-liganded 14-3-3σ protein: insights into determinants of isoform specific ligand binding and dimerization[J];Cell Research;2005年04期

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本文編號(hào)：2637456