發(fā)布時(shí)間：2020-04-19 21:20

【摘要】：毛竹(Phyllostachys edulis)是我國(guó)分布最廣,種植面積最大,資源最多,開(kāi)發(fā)利用最高的優(yōu)良竹類(lèi)植物。毛竹適合在濕潤(rùn)、高溫、微酸性或中性土壤的地區(qū)生長(zhǎng)。低溫、干旱、黑暗等逆境會(huì)對(duì)毛竹的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生嚴(yán)重的影響,因此研究毛竹的抗逆機(jī)制具有重要意義。本文基于本實(shí)驗(yàn)室對(duì)毛竹抗逆基因PeMYB的研究,采用PCR擴(kuò)增的方法對(duì)毛竹PeMYB啟動(dòng)子進(jìn)行克隆,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,以及該啟動(dòng)子全長(zhǎng)的活性驗(yàn)證和5’端缺失的功能分析研究。研究結(jié)果如下:1.采用PCR擴(kuò)增的方法對(duì)毛竹PeMYB基因的啟動(dòng)子進(jìn)行克隆,獲得長(zhǎng)度為1332bp的毛竹PeMYB基因的啟動(dòng)子序列PeMYBpro,基因編號(hào)為PH01000142。2.運(yùn)用PLANTCARE軟件對(duì)PeMYBpro啟動(dòng)子序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析;結(jié)果顯示PeMYBpro啟動(dòng)子序列中不僅包含MYB的核心元件;也含有大量與光、低溫、干旱、脫落酸、茉莉酸、水楊酸、赤霉素等非生物脅迫有關(guān)的響應(yīng)元件。3.通過(guò)構(gòu)建pCAMBIA1301-PeMYBpro啟動(dòng)子全長(zhǎng)植物表達(dá)載體分析PeMYBpro啟動(dòng)子活性;在洋蔥表皮中進(jìn)行pCAMBIA1301-PeMYBpro的瞬時(shí)表達(dá)分析;GUS基因的活性染色表明PeMYBpro啟動(dòng)子具有誘導(dǎo)型啟動(dòng)子活性,且在低溫、干旱、黑暗脅迫誘導(dǎo)下有較強(qiáng)的活性。4.成功構(gòu)建pCAMBIA1301-PMpro-P1、pCAMBIA1301-PMpro-P2、pCAMBIA1301-PMpro-P3、pCAMBIA1301-PMpro-P4四個(gè)5’缺失植物表達(dá)載體;瞬時(shí)表達(dá)分析后,分別對(duì)GUS基因進(jìn)行活性染色分析和定量分析。結(jié)果顯示:這4個(gè)片段都具有誘導(dǎo)型啟動(dòng)子得活性,啟動(dòng)子PeMYBpro在-1332~-1033bp之間并無(wú)與干旱、低溫、黑暗三類(lèi)脅迫密切相關(guān)的啟動(dòng)子元件;在-1032~-740bp之間存在大量與干旱脅迫有關(guān)的響應(yīng)元件;在-450~-141bp之間存在能夠響應(yīng)低溫脅迫的元件;在-1032~-740bp和-449~-141bp之間存在大量與光響應(yīng)相關(guān)的啟動(dòng)子元件。
【圖文】：

第一章 文獻(xiàn)綜述 R 串聯(lián)組成，一般可分為四類(lèi)：R2R3-MYB、R1-MYB、R1R2R3-MYR-MYB[57]。R2R3-MYB 轉(zhuǎn)錄因子是植物中最多的轉(zhuǎn)錄因子，占據(jù) MYB 基因半以上，自身具有的功能也很多樣化，在植物的發(fā)育，代謝等過(guò)程中有必要，也因此使其成為主要的研究對(duì)象[58]。R1-MYB 轉(zhuǎn)錄因子是含有一個(gè)或不完 R 結(jié)構(gòu)，包括 ASSOCIATEDI 和 CIRCADIAN CLOCK 等，主要參與植物激累生物鐘調(diào)控等，，在 MYB 基因家族中的數(shù)量較多[59]。R1R2R3-MYB 轉(zhuǎn)錄是三個(gè)不同的 R 結(jié)構(gòu)單元組成的 MYB 結(jié)構(gòu)域，這類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子數(shù)量較多，主與植物細(xì)胞周期、分化[60]。目前已有 200 多種 MYB 轉(zhuǎn)錄因子被鑒定出的植物中的 MYB 轉(zhuǎn)錄因子參與植物本身的生長(zhǎng)發(fā)育、生理代謝和細(xì)胞的分化1-63]。

圖 2-1 毛竹基因組 DNA 電泳結(jié)果sis results of Phyllostachys edulis genomic D取一年生毛竹葉片的基因組DNA,瓊脂5 泳道中基因組 DNA 條帶單一明亮，無(wú)計(jì)（ND-1000）測(cè)得毛竹基因組 D
【學(xué)位授予單位】：浙江農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2

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本文編號(hào)：2633752