【摘要】：類(lèi)受體激酶是植物體內(nèi)信號(hào)分子的重要受體,幾乎參與了所有的細(xì)胞代謝過(guò)程,包括生長(zhǎng)發(fā)育、表達(dá)調(diào)控和逆境反應(yīng)等。ERECTA是從擬南芥中分離得到的一種類(lèi)受體激酶基因,該基因在調(diào)控花和葉等地上器官的生長(zhǎng)發(fā)育、權(quán)衡擬南芥光合作用和蒸騰作用、參與激素調(diào)節(jié)、識(shí)別與轉(zhuǎn)導(dǎo)光信號(hào)以及抗病抗逆信號(hào)等生理生化過(guò)程中扮演重要角色。本研究以從高粱中分離克隆的一種ERECTA基因(SbER2)為研究對(duì)象,通過(guò)轉(zhuǎn)入擬南芥原生質(zhì)體進(jìn)行亞細(xì)胞定位,構(gòu)建VE2表達(dá)載體并進(jìn)行玉米遺傳轉(zhuǎn)化,對(duì)獲得的過(guò)表達(dá)SbER2轉(zhuǎn)基因植株與對(duì)照非轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行不同程度干旱脅迫處理,分析各項(xiàng)抗旱性指標(biāo)在不同處理之間的差異,解析SbER2基因在抗旱中的生物學(xué)功能。主要研究結(jié)果如下:(1)運(yùn)用生物信息學(xué)方法對(duì)SbER2基因進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)分析,并成功構(gòu)建了pE3449-SbER2載體,轉(zhuǎn)導(dǎo)擬南芥原生質(zhì)體,通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察GFP位置,初步確定SbER2基因蛋白在細(xì)胞膜、葉綠體、線粒體和細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中表達(dá)。(2)構(gòu)建VE2表達(dá)載體,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將目的基因SbER2轉(zhuǎn)入玉米材料ZPM9,并進(jìn)行分子檢測(cè),成功獲得SbER2轉(zhuǎn)基因植株;(3)將SbER2轉(zhuǎn)化T2代植株SbER2-1、SbER2-2和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓闦PM9進(jìn)行不同程度的干旱脅迫,發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)SbER2基因提高了植株的凈光合速率和水分利用效率,降低了植株體內(nèi)丙二醛的積累,增強(qiáng)了玉米受體材料對(duì)干旱脅迫的耐受程度。
【圖文】：

25圖 3.2 pE3449 載體的雙酶切驗(yàn)證2 Verification of pE3449 carrier by double enzyMarker 1Kb 由上至下依次為（Kb）：10、8、6、5、4、ker 15Kb 由上至下依次為（Kb）：15、10、7.5、5、3、切產(chǎn)物的電泳條帶約為4Kb，和pE3449載可以確定 6 條帶均為陽(yáng)性條帶，將凝膠條帶

圖 3.1 pE3449-SbER2 表達(dá)載體的的構(gòu)建流程Figure 3.1 The construction process of pE3449-SbER2 expression vectorpE3449 載體的構(gòu)建E3449 載體經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化、搖菌和提取質(zhì)粒后，測(cè)得質(zhì)粒濃度大部00ng/ul，滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求，可以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。通過(guò) KpnI/Xm9 載體，進(jìn)行電泳、凝膠成像儀（Tanon 1600）成像分析（圖 3.2）。圖 3.2 pE3449 載體的雙酶切驗(yàn)證
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S514

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2632205