【摘要】：WRKY是一大類轉(zhuǎn)錄因子,在脅迫反應(yīng)和植物發(fā)育過程中很重要。到目前為止,在擬南芥中已經(jīng)有許多報(bào)道,但關(guān)于草莓WRKY功能知之甚少。本研究從森林草莓(Fragaria vesca)中克隆出FvWRKY71基因編碼區(qū)序列,構(gòu)建了其過表達(dá)和沉默載體,獲得了轉(zhuǎn)基因擬南芥和草莓植株,通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析得到相關(guān)差異表達(dá)的基因,為揭示草莓WRKY71基因的功能和作用機(jī)理打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:(1)利用RT-PCR技術(shù)從森林草莓資源‘Ruegen’中克隆出FvWRKY71基因序列,基因編碼區(qū)序列全長1107 bp。轉(zhuǎn)錄活性分析和亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)證明FvWRKY71是具有轉(zhuǎn)錄激活活性的核定位蛋白。(2)利用qRT-PCR方法檢測了‘Ruegen’草莓不同組織中的相對表達(dá)量,FvWRKY71主要在果實(shí)中表達(dá),并且隨著果實(shí)的成熟表達(dá)量顯著升高。紅果期的轉(zhuǎn)錄水平最高,其表達(dá)水平約為綠果期的6倍,而在根、葉柄、葉片和花中表達(dá)量相對較低。(3)構(gòu)建了FvWRKY71基因的植物過表達(dá)載體和RNAi載體,并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化將其轉(zhuǎn)化到擬南芥和草莓中,得到過表達(dá)FvWRKY71的擬南芥轉(zhuǎn)基因株系3個(gè),過表達(dá)FvWRKY71的草莓轉(zhuǎn)基因株系4個(gè),RNAi草莓轉(zhuǎn)基因株系6個(gè)。通過觀察表型和統(tǒng)計(jì)分析說明FvWRKY71具有促進(jìn)開花和增加分枝的功能。(4)通過RNA-seq分析了過表達(dá)FvWRKY71的擬南芥轉(zhuǎn)基因植株與非轉(zhuǎn)基因植株在開花和分枝有關(guān)基因表達(dá)上的差異。篩選到激素相關(guān)基因LBO1、AHP6、GA20ox2、GA3ox1、YUC1和CPK6等以及開花相關(guān)基因LFY、FPF1、FUL、SPL3和FLC等,為縮短薔薇科植物的開花時(shí)間提供研究思路。
【圖文】：

1 草莓的開花調(diào)控模式（Koskela 等，2012ing the control of flowering in Fragaria vesca (展中普遍存在，影響植物結(jié)構(gòu)形態(tài)，因此d Muhr，2015），理想的植物結(jié)構(gòu)有利是由腋生分生組織（AM）分化而來腋生分生組織的生長。AM 首先形成具成分枝結(jié)構(gòu)（McSteen and Leyser，200傳因子的影響，激素和環(huán)境因素主要調(diào)控植物的分枝發(fā)育。分枝或分蘗的分枝越少產(chǎn)量越高，這在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中意種生物學(xué)手段，研究發(fā)現(xiàn)了許多基因可取得一定進(jìn)展。另外，植物激素對分枝發(fā)

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文的過表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥地上部組織為材料，野生型作為重復(fù)和三個(gè)技術(shù)重復(fù)。采用 Illumina 技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測分析流程分別見圖 2 和圖 3。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S668.4

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本文編號：2629192