【摘要】：背景及目的非手術性甲狀旁腺功能減退癥(non-surgicalhypoparathtroidism,Ns-HypoPT)是由除手術以外的其他病因如遺傳因素、免疫因素等引起甲狀旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)合成、分泌或作用障礙,引起機體鈣磷代謝紊亂的疾病。目前成年起病Ns-HypoPT病因尚未明確。近年來國內(nèi)外有關單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)與原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥發(fā)生及臨床表型的關聯(lián)研究較多,但僅有兩個研究分別分析了PTH、R基因個別SNPs與Ns-HypoPT發(fā)病及臨床特點的相關性。本研究旨在探討目前已知的與甲旁減發(fā)病相關的基因,其基因多態(tài)性與成年起病Ns-HypoPT發(fā)生及臨床表型的相關性。方法通過PubMed數(shù)據(jù)庫查找目前發(fā)現(xiàn)與Ns-HypoPT發(fā)病及臨床表型相關的基因作為候選基因,包括 CASR、GNA11、PTH、TBX1、AIRE、GATA3、GCM2、TBCE、FAM111A、SOX3、VDR、CLDN16 和 TRPM6。用 NCBI、1000 Genomes 和 Hapmap 數(shù)據(jù)庫篩選候選基因位于功能區(qū)域(3'UTR、5'UTR、啟動子區(qū)及外顯子區(qū))的SNPs,且在中國漢族人群的最小等位基因頻率5%,并通過 SNP Function Prediction、miRDB、microRNA.org、TargetScan 7.0 和 PolymiRTS Database 軟件預測 3'UTR 區(qū) SNPs 與 miRNA 的結(jié)合性,使用SNP Function Prediction、PROMO、TFBind 軟件預測 5'UTR 或啟動子區(qū)的 SNPs 是否為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合序列。選取至少2個軟件預測結(jié)果一致的位點。因GNA11基因功能區(qū)域SNPs在病例-對照組間存在分布差異,故同時納入GNA11基因的10個TagSNPs,一同設計成芯片,應用飛行時間質(zhì)譜法(MassARRAY)對納入的203例成年起病Ns-HypoPT和209例年齡及性別匹配的正常對照進行基因分型,Sanger測序驗證分型結(jié)果的準確性,利用卡方檢驗、logistic回歸分析上述SNPs與成年起病Ns-HypoPT發(fā)病及臨床表現(xiàn)的相關性。結(jié)果1、從上述13個候選基因中篩選出符合條件的SNPs,并選擇基因分型成功率在95%,在對照組中符合Hardy-Weinberg平衡的位點,Sanger測序驗證準確性達100%,最終共有37個位點進入統(tǒng)計學分析;2、只有GNA11基因SNPs在病例-對照組間的分布有顯著差異,其中rs11084997位點C等位基因降低Ns-HypoPT發(fā)病風險[OR=0.382(加性模型)、0.647(顯性模型),P0.05),rs308060位點T等位基因增加Ns-HypoPT發(fā)病風險[OR=3.269(加性模型)、2.864(顯性模型)、2.727(隱性模型),P0.05)]。3、在病例-對照組間比較GNA11基因13個位點組成的單體型分布頻率,由rs11084997及rs4806907少見等位基因組成的CC單體型在病例組的分布頻率低于對照組(P0.05)。由rs308060位點少見等位基因T及其他位點組成的單體型TTCGCC在病例組的分布頻率更高(P0.05)。4、GNA11基因SNPs與臨床表型的相關性:1)攜帶rs308049位點少見等位基因T(TT+TC)的患者血鈣水平低于CC基因型者(P0.05),由其組成的單體型CCGGCT與PTH水平有關,攜帶1條以上此單體型的患者 PTH 更低(P0.05);2)攜帶rs7803011位點G等位基因的患者(GG+GA)顱內(nèi)鈣化發(fā)生率較不攜帶者(AA)低,校正年齡、性別、血鈣、血磷后,仍是顱內(nèi)鈣化的保護因素(OR=0.349,P0.05)。3)在女性患者中,rs385443、rs3746069、rs308033、rs308039位點不同基因型的骨密度及其Z值存在差異(P0.05)。攜帶rs17828831位點少見等位基因A的男性患者股骨頸、全髖及腰椎骨密度高于其他基因型患者(P0.05)。4)攜帶rs4806907位點C等位基因、rs385443位點G等位基因的患者出現(xiàn)高鈣尿癥的風險顯著升高(OR=4.192,P0.001;OR=2.677,P=0.011)。由 rs4806907 位點 C 等位基因組成的單體型CC、CG亦與高鈣尿癥發(fā)生有關(P0.05)。5、Spearman相關性分析發(fā)現(xiàn),VDR基因rs739837的基因型分布與血鈣水平相關(r=0.186,P=0.026),血鈣水平隨著少見等位基因T的個數(shù)增加而升高。此等位基因與rs2228570位點的G等位基因增加治療后高鈣尿癥的發(fā)生風險(P=0.042;P=0.024)。結(jié)論1、本研究發(fā)現(xiàn)GNA11基因的rs110844997、rs308060位點可能與成年起病Ns-HypoPT發(fā)病相關,前者的少見等位基因可能是Ns-HypoPT的保護因素,而后者少見等位基因可能是Ns-HypoPT的危險因素。2、rs308049、rs7803011、rs385443、rs3746069、rs308033、rs308039、rs4806907 可能與Ns-HypoPT部分臨床表型有關。3、VDR基因的rs739837、rs2228570位點可能與患者對維生素D制劑的治療反應有關。背景及目的非手術性甲狀旁腺功能減退癥(Ns-HypoPT)DXA檢測的面積骨密度(arealbone mineral density,aBMD)往往較正常人明顯升高,而不同分型的假性甲狀旁腺功能減退癥(psuedohypoparathyroidism,PHP)患者骨代謝特征存在一定的差異,但有關其骨量及骨骼微結(jié)構(gòu)的研究很少,且僅有的研究并未分別評估不同分型PHP患者的骨代謝特點,結(jié)果具有較大的異質(zhì)性。高分辨率外周定量計算機斷層掃描(High resolution peripheral quantitative CT,HRpQCT)是一種新型、無創(chuàng)的評價橈骨和脛骨遠端體積骨密度、骨幾何學結(jié)構(gòu)、骨微結(jié)構(gòu)的技術,可分別測定皮質(zhì)骨和松質(zhì)骨的相關參數(shù)。目前國內(nèi)外只有兩項應用HRpQCT評估Ns-HypoPT、PHP患者骨骼受累的研究,其中未分別觀察PHP1A、1B患者。本研究旨在采用HRpQCT技術評估中國大陸人群Ns-HypoPT、PHP1A和PHP1B患者骨骼微結(jié)構(gòu)特征,并比較三類疾病DXA及HRpQCT所測各項參數(shù)的異同。方法本研究共納入2016年1月至2017年12月于北京協(xié)和醫(yī)院內(nèi)分泌科診治的Ns-HypoPT患者40例,PHP1A患者11例,PHP1B患者31例,收集所有患者的臨床資料及DXA檢測結(jié)果,在簽署知情同意書后對其進行HRpQCT檢測及數(shù)據(jù)分析。結(jié)果1、Ns-HypoPT患者的β-CTX中位數(shù)為0.24ng/ml,位于正常偏低水平。與之相比,PHP1B患者的β-CTX、ALP水平較高(P=0.020;P0.001),且在成人患者中發(fā)現(xiàn)以上兩個指標與 PTH 呈正相關(r=0.720,P=0.008;r=0.718,P=0.001)。2、Ns-HypoPT、PHP1B患者間aBMD的比較:本研究僅有3例PHP1A患者完成DXA檢測,因此主要比較了 Ns-HypoPT、PHP1B患者股骨頸、全髖與L2-L4的aBMD及其Z值結(jié)果。其中Ns-HypoPT患者各部位aBMD相應的Z值較高,均值在1.3～2.5,部分患者甚至達5.0以上。在校正年齡、性別及BMI后,PHP1B組患者各部位aBMD及其對應Z值均低于 Ns-HypoPT 患者(P0.05)。3、三組患者與正常對照組間HRpQCT各項參數(shù)的比較:1)Ns-HypoPT與正常對照:患者脛骨松質(zhì)骨體積骨密度(Tb.vBMD)及小梁骨數(shù)量(Tb.N)較正常對照升高(P0.05),小梁骨分離度(Tb.Sp)、小梁骨不均一性(Tb.1/N.SD)降低(P0.001)。2)Ns-HypoPT與PHP1A:除PHP1A患者的脛骨小梁骨不均一性(Tb.1/N.SD)高于Ns-HypoPT患者(P=0.027)外,兩組患者橈骨及脛骨的其他參數(shù)未見顯著差異(P0.05)。3)Ns-HypoPT與PHP1B:PHP1B患者橈骨小梁骨體積骨密度(Tb.vBMD)、小梁骨體積分數(shù)(Tb.BV/TV)、小梁骨厚度(Tb.Th)均顯著低于Ns-HypoPT患者(P0.05),皮質(zhì)骨孔隙度(Ct.Po)則顯著高于Ns-HypoPT患者(P=0.030);脛骨的小梁骨分離度(Tb.Sp)、小梁骨不均一性(Tb.1/N.SD)顯著高于Ns-HypoPT患者(P0.05)。4)PHP1A、PHP1B與正常對照:PHP1A及1B患者分別與正常對照組相比,各項參數(shù)均未見顯著差異。而兩種分型的PHP患者相比可見,PHP1B患者橈骨的Tb.vBMD、Tb.BV/TV、Tb.Th顯著低于PHP1A患者(P0.05),但其他參數(shù)及脛骨的各項參數(shù)未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的差異(P0.05)。4、Ns-HypoPT、PHP1B患者aBMD、HRpQCT各項參數(shù)與臨床特點的相關性:1)Ns-HypoPT:Ns-HypoPT患者的病程與腰椎(L2-L4)aBMD及其相應Z值,橈骨Ct.vBMD、Tb.vBMD、Tb.BV/TV、Tb.N、Tb.1/N.SD 呈正相關(β=0.002、0.017、0.161、0.175、0.240、0.100、0.002,P0.05),與橈骨 Tb.Sp、脛骨 Ct.Po 呈負相關(β=-0.001、-0.400,P0.05)。2)PHP1B:PHP1B 患者的病程與橈骨 Tb.BV/TV、Tb.N、Tb.Th 呈負相關(β=-0.231、-0.001、-0.171,P0.05),與橈骨 Tb.Sp、Tb.1/N.SD 呈正相關(β=0.001,P0.05)。PTH與PHP1B患者橈骨與脛骨的Tb.N呈負相關(β=-0.182、-0.206,P0.05),與脛骨Tb.Sp 呈正相關(β=0.313,P0.05)。結(jié)論1、Ns-HypoPT患者骨轉(zhuǎn)換指標位于正常偏低水平;PHP1B患者的骨轉(zhuǎn)換指標較其升高,且在成人患者中與PTH水平呈正相關。2、Ns-HypoPT患者各部位aBMD的Z值明顯升高,而PHP1B患者各部位aBMD及其Z值明顯低于Ns-HypoPT。3、Ns-HypoPT患者脛骨松質(zhì)骨體積骨密度及小梁骨數(shù)量較正常對照升高,小梁骨的松化程度降低。4、PHP1B患者橈骨、脛骨的松質(zhì)骨結(jié)構(gòu)參數(shù)(Tb.vBMD、Tb.BV/TV、Tb.Th)低于Ns-HypoPT、PHP1A患者,但與正常對照相比無明顯差異。5、Ns-HypoPT患者病程與其股骨頸及腰椎的aBMD,橈骨的Ct.vBMD、Tb.vBMD,部分骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)如Tb.BV/TV、Tb.N呈正相關,與橈骨Tb.Sp、脛骨Ct.Po呈負相關。6、PHP1B患者PTH與股骨頸aBMD的Z值,橈骨皮質(zhì)骨vBMD,脛、橈骨Tb.N呈負相關,與脛骨Tb.Sp呈正相關;而病程與橈骨總vBMD、Tb.BV/TV、Tb.N、Tb.Th呈負相關,與Tb.Sp、Tb.1/N.SD呈正相關。
【圖文】：

２、ＳＮＰ分型結(jié)果準確性驗證逡逑隨機挑選１０％樣本，使用Ｓａｎｇｅｒ測序方法檢測不同樣本各位點的基因示兩種方法的符合率達１００％邋（測序驗證圖見圖１．４，以基因各位ＭａｓｓＡＲＲＡＹ法分型準確性達１００％，結(jié)果可信度高。逡逑

不超過３次。重復掃描后圖像質(zhì)量仍較差者須排除。根據(jù)ＥｎｇｅｌｋｅＫｔＷ提出的視覺分級系逡逑統(tǒng)，將圖像質(zhì)量等級分為４級：Ｇ１邋（無運動偽影，，優(yōu)）、Ｇ２邋（運動偽影輕微，良）、Ｇ３逡逑（運動偽影中等，中）、Ｇ４邋（運動偽影重，差），等級為Ｇ４的圖像要去除（圖２．４）。逡逑１０１逡逑
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R582.2

【參考文獻】

相關期刊論文 前9條

1 李悅們;王鷗;全婷婷;夏維波;姜艷;李梅;孟迅吾;邢小平;;應用二代基因測序檢測成年起病特發(fā)性甲狀旁腺功能減退癥的致病基因[J];中華內(nèi)科雜志;2016年08期

2 何斐;李皖生;張偉;徐靈芝;;特發(fā)性甲狀旁腺功能減退的診斷與治療[J];中國初級衛(wèi)生保健;2013年04期

3 王桂華;趙建寧;;骨質(zhì)量的影響因素及其檢測方法[J];醫(yī)學研究生學報;2011年10期

4 張鳳麗;王鷗;邢小平;李梅;孟迅吾;周學瀛;;特發(fā)性甲狀旁腺功能減退癥的維生素D受體基因多態(tài)性[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2010年07期

5 伍西羽;伍賢平;張紅;曹行之;單鵬飛;廖二元;;長沙地區(qū)青少年兒童男性與女性骨密度積累的比較[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2008年12期

6 張智海;沈建雄;劉忠厚;;DXA骨密度儀在國內(nèi)標一化回顧性研究[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2005年02期

7 姜艷,孟迅吾,邢小平,夏維波,胡瑩瑩;小兒原發(fā)性甲狀旁腺功能減退癥61例分析[J];中國實用兒科雜志;2004年12期

8 華峰;低鈣性白內(nèi)障1例[J];臨床眼科雜志;2001年03期

9 方定華;;原發(fā)性甲狀旁腺機能減低的腦電圖與CT所見的關系[J];中華神經(jīng)科雜志;1991年05期

本文編號：2627093