【摘要】：本試驗以蘋果砧木M26為材料,在前期磷酸化蛋白組學(xué)測序的基礎(chǔ)上,篩選出TFIIE(General transcription factor IIE subunit 1-like)、ACBP4(Acyl-CoA-binding domain-containing protein 4)和MAP70-1(Microtubule-associated protein 70-1-like)差異蛋白,再通過RT-PCR法克隆TFIIE、ACBP4和MAP70-1基因,同時構(gòu)建植物雙元表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將上述三個基因成功導(dǎo)入WS Columbia擬南芥(Arabidopsis thaliana)植株中,并應(yīng)用PEG脅迫對TFIIE、ACBP4和MAP70-1基因進(jìn)行功能鑒定。主要研究結(jié)果如下:1.克隆得到TFIIE、ACBP4和MAP70-1基因,基因登錄號分別為MG878870、MG878871、MG878872。TFIIE和ACBP4基因,片段大小分別為1413 bp、2016 bp,均與白梨氨基酸序列同源性最高,分別為97.87%、94.82%;MAP70-1基因片段大小為1860bp,與草莓MAP70-1氨基酸序列同源性高達(dá)91.20%。2.熒光定量PCR顯示,M26蘋果盆栽苗在持續(xù)控水20 d、40 d和60 d時,TFIIE的表達(dá)水平均上調(diào);ACBP4的表達(dá)水平下調(diào);MAP70-1的表達(dá)相對穩(wěn)定。3.構(gòu)建組成型啟動子35S驅(qū)動的植物雙元表達(dá)載體,并成功轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105,命名為pBI121/TFIIE/EHA105、pBI121/ACBP4/EHA105、pBI121/MAP70-1/EHA105。4.分別轉(zhuǎn)化獲得3個基因的轉(zhuǎn)基因T_2代擬南芥植株。經(jīng)15%PEG脅迫處理,轉(zhuǎn)基因擬南芥中TFIIE基因上調(diào)2.35倍,ACBP4基因下調(diào)1/3,MAP70-1基因與對照無顯著性差異。這3個基因的T_2代轉(zhuǎn)基因種子在PEG脅迫下的萌發(fā)率分別為90.3%、76.23%和88.66%,成活率分別為79.68%、28.30%和54.35%。
【圖文】：

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文雜帶污染，將擴(kuò)增片段從凝膠中回收，用于下一步的試驗。目的片段與M-T 載體連接之后，轉(zhuǎn)化為重組子，利用 α-互補(bǔ)選擇法篩選純化，在涂有l(wèi)、IPTG、Amp 的平板上，挑取白色菌落為重組子，藍(lán)色菌落為非重組子，組子搖起的菌液為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增檢測，，獲得與目的條帶大小一致的單帶。測序結(jié)果為 TFIIE 基因片段大小為 1413bp，ACBP4 基因片段大小為bp，MAP70-1 基因片段大小為 1860bp。M 1 2M 1 2M 1 2

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文22圖2-4 蘋果砧木 ACBP4與其他植物 ACBP4同源蛋白的多序列比對分析Fig. 2-4 Mutiple sequence alignment analysis of ACBP4 with ACBP4 homologs from other plants將 MAP70-1 編碼的氨基酸序列與相近物種的氨基酸序列進(jìn)行多序列比對分析（圖 2-5），結(jié)果顯示 MAP70-1 與其他物種的總相似度達(dá)到 90.74 %，與蘋果（Malus x domestica XM_008390949.2）的同源性最高，為 95.48 %；與甜櫻桃（Prunus avium XM_021965382.1）的同源性為 94.38 %，與桃（Prunus persicaXM_007221942.2）的同源性為 94.22 %，與草莓（Fragaria vesca XM_004297386.2）的同源性為 91.20 %，與葡萄（Vitis vinifera XM_002284868.3）的同源性為83.05 %，與甜橙（Citrus sinensis XM_006469189.2）的同源性為 83.23 %。蘋果 Malus x domestica白梨 Pyrus
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S661.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 丁震乾;陳天子;劉廷利;劉小雙;張保龍;周興根;;棉花干旱誘導(dǎo)MYB類轉(zhuǎn)錄因子GhRAX3的功能分析[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年18期

2 米寶琴;毛娟;申鵬;陳佰鴻;郝燕;楊瑞;;山葡萄‘通化-3’抗寒相關(guān)基因SSH文庫的構(gòu)建及分析[J];果樹學(xué)報;2015年04期

3 李嵐;王厚領(lǐng);趙琳;趙瑩;李惠廣;夏新莉;尹偉倫;;異源表達(dá)Peu-miR473a增強(qiáng)擬南芥的抗旱性[J];北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報;2015年05期

4 邢淑蓮;姚艷麗;徐磊;胡小文;劉洋;;禾本科主要作物抗旱相關(guān)基因及轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2014年18期

5 曹忠慧;王榮凱;郝玉金;;蘋果MdMYB121基因異位表達(dá)提高煙草的抗逆性[J];園藝學(xué)報;2013年06期

6 郭彬;侯思宇;黃可盛;路陽;韓淵懷;王玉國;;大豆總RNA提取方法比較及其在基因克隆和表達(dá)分析中的應(yīng)用[J];分子植物育種;2013年02期

7 張靜;趙亮明;鄒志榮;;不同蘋果砧木組培苗抗旱性的比較研究[J];果樹學(xué)報;2013年01期

8 吳昆侖;鄧曉青;姚曉華;;裸大麥PKABA1基因?qū)崟r熒光定量PCR方法的建立[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年12期

9 柏素花;祝軍;戴洪義;;蘋果�；o酶A結(jié)合蛋白2編碼基因MdACBP2的克隆和表達(dá)分析[J];園藝學(xué)報;2012年10期

10 魯少尉;齊飛;李天來;;NaCl及等滲PEG脅迫對番茄葉片光合特性及蔗糖代謝的影響[J];華北農(nóng)學(xué)報;2012年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉子妍;類受體激酶CRPK1調(diào)控擬南芥低溫應(yīng)答的分子機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 廖嬋璨;擬南芥轉(zhuǎn)錄因子MYB30通過胞內(nèi)鈣信號調(diào)控脅迫響應(yīng)的機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 楊義伶;木薯CC-type MeGRXs及MeDREB1D基因抗旱功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 趙帥;擬南芥轉(zhuǎn)錄因子ARF2響應(yīng)低鉀脅迫的分子機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 黃蕓;擬南芥WRKY6和PHO1參與ABA調(diào)控種子萌發(fā)和早期幼苗生長過程的分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 蔡榮號;玉米WRKY轉(zhuǎn)錄因子Ⅱd亞族抗逆相關(guān)基因的鑒定及ZmWRKY17的功能分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 金晶;玉米逆境響應(yīng)相關(guān)基因ZmUBP的功能鑒定與WRKY基因家族進(jìn)化分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 王琳;AT14A在擬南芥響應(yīng)PEG模擬干旱脅迫中的功能分析[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

9 何志敏;擬南芥轉(zhuǎn)錄因子TCP2與CRY1相互作用的遺傳學(xué)與生化分析[D];湖南大學(xué);2016年

10 陳泉;BnSGS3基因遺傳轉(zhuǎn)化油菜和擬南芥及轉(zhuǎn)基因植株對不同病毒抗性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吳美琴;玉米PIFs轉(zhuǎn)基因水稻節(jié)水抗旱功能解析及農(nóng)藝性狀初步分析[D];揚(yáng)州大學(xué);2017年

2 劉雪;馬鈴薯MAPKK基因鑒定及其抗旱相關(guān)功能基因篩選[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 冉應(yīng)龍;干旱脅迫對2個蘋果砧木水分生理及AQPs表達(dá)水平的影響[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

4 朱熙;馬鈴薯MAPK基因鑒定及抗旱相關(guān)MAPK功能基因篩選[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 王慶杰;蘋果細(xì)胞質(zhì)蘋果酸脫氫酶基因的抗逆功能鑒定及機(jī)制研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 秦朋飛;棉花�；o酶A結(jié)合蛋白家族基因的發(fā)掘及在非生物脅迫抗性中的功能鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 魏曉愛;擬南芥應(yīng)答非生物脅迫WRKY基因的篩選及功能分析[D];東北林業(yè)大學(xué);2016年

8 韓曉毓;不同蘋果砧木導(dǎo)水特性與水通道蛋白基因表達(dá)對干旱與鹽脅迫的響應(yīng)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

9 李桂平;大豆WRKY、Exo70及其相關(guān)基因在抗旱性與生長發(fā)育中的功能[D];浙江大學(xué);2015年

10 杜凡;蘋果冷脅迫下差異表達(dá)基因的篩選及新抗逆基因MdTLP7的功能鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

本文編號：2615323