【摘要】：中華鱉是我國尤其是南方地區(qū)的重要水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一,它不僅味道鮮美更蘊(yùn)含很高的藥用價(jià)值。近年來,隨著國民經(jīng)濟(jì)水平的提高和我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的大力發(fā)展,人們對(duì)于中華鱉的購買力度和需求不斷提升,這也使得中華鱉的養(yǎng)殖生產(chǎn)規(guī)模不斷擴(kuò)大,高密度集約化的養(yǎng)殖生產(chǎn)成為常態(tài),但同時(shí)也引發(fā)了諸多問題。養(yǎng)殖水體環(huán)境不斷惡化,種質(zhì)資源嚴(yán)重退化,這都導(dǎo)致中華鱉頻繁應(yīng)激以致疾病頻發(fā),成活率降低,對(duì)養(yǎng)殖生產(chǎn)造成巨大損失。應(yīng)激是指機(jī)體所處環(huán)境發(fā)生變化或由其他因素導(dǎo)致機(jī)體自身穩(wěn)態(tài)失衡的狀況,其廣泛存在于各種動(dòng)植物體內(nèi)。當(dāng)機(jī)體在受到外界刺激時(shí),會(huì)促使腎上腺皮質(zhì)對(duì)糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid,GC)的分泌量增加。糖皮質(zhì)激素也被稱為“腎上腺皮質(zhì)激素”,GC不僅能夠調(diào)控蛋白質(zhì)、糖類以及脂類的合成,更參與調(diào)節(jié)這些物質(zhì)的代謝過程。GC還具有抗炎作用,是生物體對(duì)外界環(huán)境脅迫響應(yīng)的重要組成部分,而爬行動(dòng)物如龜鱉等的糖皮質(zhì)激素主要為皮質(zhì)酮(Corticosterone,CORT)。應(yīng)激反應(yīng)能夠在一定程度上調(diào)節(jié)機(jī)體穩(wěn)態(tài),使機(jī)體保持健康狀態(tài),但長期處于應(yīng)激狀態(tài)會(huì)使皮質(zhì)酮水平持續(xù)處于升高狀態(tài)從而抑制機(jī)體免疫能力,對(duì)自身的生長和免疫能力產(chǎn)生巨大危害。本實(shí)驗(yàn)對(duì)正常生長狀態(tài)下的中華鱉不同月齡、不同性別和不同體重間的血漿皮質(zhì)酮水平含量進(jìn)行了研究分析;并以28℃條件下的中華鱉為恒溫對(duì)照組,研究不同程度的溫度變化(10℃、20℃、33℃)對(duì)1冬齡體重差異不大的中華鱉血漿CORT水平、免疫生化指標(biāo)以及血漿抑菌效果的影響,并對(duì)不同溫度環(huán)境條件下的中華鱉皮質(zhì)酮合成酶相關(guān)的基因MC2R(Melanocortin-2 receptor,即黑素皮質(zhì)素2型受體,又稱促腎上腺皮質(zhì)激素受體:Adreno Cortico Hormones Receptor,ACTH-R)、NR4A1(Nuclear Receptor Subfamily 4 Group A Member 1,皮質(zhì)酮合成酶的轉(zhuǎn)錄因子之一)的表達(dá)進(jìn)行了初步研究探索,實(shí)驗(yàn)擬為中華鱉溫度免疫應(yīng)激研究及養(yǎng)殖生產(chǎn)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)的具體研究內(nèi)容如下:1.中華鱉本底水平CORT研究不同月齡大小的中華鱉其體重會(huì)隨著月齡的增加呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢,而不同月齡中華鱉個(gè)體間其體重都有極顯著性的差異(P0.01);伴隨月齡的增加CORT的含量呈現(xiàn)出下降的趨勢,并且12月齡個(gè)體的血漿CORT含量顯著高于于24月齡(P0.01);中華鱉同一性別不同月齡間體重均有極顯著性差異(P0.01),但在相同月齡內(nèi)雌雄個(gè)體間其體重并無顯著性差異(P0.05),且同一月齡中華鱉不同性別間CORT含量無顯著性差異(P0.05);對(duì)同一月齡以及整體不同月齡(12、18、24月齡總體)中華鱉的體重和CORT含量進(jìn)行線性分析結(jié)果顯示,體重與CORT含量之間有一定的相關(guān)性,且CORT隨體重的增加呈下降趨勢,但二者間的關(guān)聯(lián)性不大。2.溫度變化對(duì)中華鱉血漿皮質(zhì)酮含量的影響當(dāng)環(huán)境溫度變化時(shí),10℃和20℃組的中華鱉血漿CORT含量隨處理時(shí)間的增加呈先升后降的變化,且在4 h和6 h時(shí)與對(duì)照組有顯著性差異(P0.05);33℃處理組的血漿CORT含量隨處理時(shí)間的增加呈波動(dòng)性變化,且與對(duì)照組間不存在顯著性差異(P0.05)。此外,各個(gè)溫度處理組除33-12(33℃處理12 h)的中華鱉血漿CORT含量相較于對(duì)照組略低外,其他各個(gè)溫度處理組的CORT含量均高于對(duì)照組。3.溫度變化對(duì)中華鱉血漿生化免疫指標(biāo)及抑菌效果的影響隨著中華鱉在不同溫度條件下處理時(shí)間的增加,其體內(nèi)血漿的酶活性和蛋白含量出現(xiàn)先升后降的變化,但這種動(dòng)態(tài)變化與對(duì)照組不存在顯著性的差異(P0.05);與對(duì)照組相比,溶菌酶(Lysozyme,LZM)的含量整體升高,而總蛋白(Total Protein,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)和堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)的含量和活性整體下降。中華鱉血漿抑菌效果以恒溫對(duì)照組(28℃)最佳,在同一時(shí)間處理段,隨著溫度變化幅度增加,抑菌效果逐漸變?nèi)?且10℃組的抑菌效果最差;而在同一溫度內(nèi),隨著溫度處理時(shí)間的增加,血漿抑菌效果先逐漸變差,然后漸漸恢復(fù),且抑菌效果在4 h和6 h時(shí)最差。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,血漿的抑菌效果與皮質(zhì)酮水平的變化是相關(guān)的,伴隨皮質(zhì)酮的水平升高血漿抑菌效果變差。4.溫度變化對(duì)中華鱉MC2R基因表達(dá)的影響中華鱉MC2R基因在腎上腺的表達(dá)量較心、肝、脾、腎以及肌肉和腦高出很多,表現(xiàn)出其特異性地表達(dá)模式。而各溫度處理組的腎上腺組織MC2R基因的相對(duì)表達(dá)量均大于恒溫對(duì)照組(28℃),且組織表達(dá)量隨溫度處理時(shí)間的增加而增大,呈現(xiàn)出上升趨勢。中華鱉各溫度處理組MC2R基因的表達(dá)量與CORT含量隨溫度處理時(shí)間的增加趨勢表現(xiàn)出一定的滯后性,但與對(duì)照相比可以明顯看出其表達(dá)量的增加;此外,各溫度處理組腎上腺組織中NR4A1基因的相對(duì)表達(dá)量整體呈先降后升的變化趨勢;其中10℃和20℃溫度組的表達(dá)量在4 h時(shí)下降,6 h時(shí)上升,而12 h時(shí)表達(dá)量接近恒溫對(duì)照組(28℃),這與不同溫度條件下的血漿皮質(zhì)酮變化情況基本相同。MC2R和NR4A1基因表達(dá)的結(jié)果從分子水平進(jìn)一步驗(yàn)證了溫度變化確實(shí)使中華鱉產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)。
【圖文】：

圖 1-1 各月齡中華鱉體重、CORT 含量差異比較Fig 1-1 Comparison of body weight and CORT contents of Chinese soft-shell turtle at differentAges注：“**”的表示二者間有極顯著性差異Note: There is a extremely significant differences between the samples marked with "**"2.2 體重和 CORT 含量比較以體重為橫坐標(biāo)，，CORT 為縱坐標(biāo)，對(duì)不同月齡以及整體（12、18、24 月齡總體）中華鱉的體重和 CORT 含量進(jìn)行線性分析得到圖 1-2。結(jié)果顯示，體重與CORT 含量之間有一定的相關(guān)性，CORT 隨體重的增加呈下降趨勢，但這種關(guān)聯(lián)性不大（12 月齡 R2=0.0313，18 月齡 R2=0.1259，24 月齡 R2=0.3128；總體 R2=0.1360）。

圖 1-2 體重和 CORT 線性分析比較Fig 1-2 Weight and CORT linear analysis2.3 不同性別個(gè)體間 CORT 含量比較分別對(duì)各月齡中華鱉不同性別間的 CORT 含量做圖，得到圖 1-3。由圖 1-3 可以看出，12 月齡中華鱉雄性個(gè)體 CORT 水平較雌性高，而 18 月齡和 24 月齡雌雄個(gè)體間 CORT 含量則基本相同；通過使用 SPSS 軟件進(jìn)行差異顯著性分析分析，結(jié)果表明，同一月齡中華鱉不同性別間 CORT 含量無顯著性差異（P>0.05）。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2605939