【摘要】：目的探討在大鼠局灶性腦缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion,CIR)后,人參皂苷Rg1對哺乳動(dòng)物雷帕霉素(mammalian rapamycin,m TOR)、微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、bcl-2同源結(jié)構(gòu)域蛋白(bcl-2 homeodomain protein,Beclin-1)在各組別腦組織頂葉中的表達(dá)規(guī)律,在此基礎(chǔ)上探討人參皂苷Rg1對局灶性腦缺血再灌注自噬損傷的調(diào)控。方法將健康的雄性大鼠隨機(jī)分為四組,分別為假手術(shù)組(sham組)、模型組(IR組)、人參皂苷Rg1給藥組(Rg1組)和人參皂苷Rg1加自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)給藥組(Rg1+3-MA組)。大鼠大腦局灶性缺血再灌注模型采用大腦中動(dòng)脈栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)2h再灌注24h的方法制備。通過觀察各組間的神經(jīng)功能缺損評分、腦組織含水量測定和2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色結(jié)果鑒定模型是否成功。運(yùn)用透射電鏡觀察各組別間大鼠腦組織神經(jīng)元中的自噬情況;采用免疫熒光和免疫印跡定性定量檢測各組間大鼠大腦頂葉m TOR、LC3、Beclin-1的表達(dá)。結(jié)果神經(jīng)功能缺損評分結(jié)果示,sham組未見神經(jīng)功能缺損癥狀;其余各組可見明顯的神經(jīng)功能缺損癥狀。腦組織含水量測定結(jié)果示,與sham組相比,其余各組的腦組織含水量明顯增加。TTC染色結(jié)果示,sham組無梗死,其余各組可見明顯蒼白色梗死灶。與Rg1組相比,IR組和Rg1+3-MA組蒼白色梗死灶體積明顯增大。透射電鏡結(jié)果示,sham組未見損傷的神經(jīng)元形態(tài);其余各組可見明顯的神經(jīng)元自噬。免疫熒光和免疫印跡結(jié)果示,IR組與Rg1+3-MA組無明顯的差異。與sham組相比,其余各組間Beclin-1、LC3表達(dá)增加,m TOR表達(dá)降低,且在Rg1組中Beclin-1、LC3表達(dá)最高,m TOR表達(dá)最低。結(jié)論人參皂苷Rg1可能通過調(diào)節(jié)大腦頂葉Beclin-1、LC3和m TOR的表達(dá)水平,使腦組織細(xì)胞自噬水平上調(diào),進(jìn)而對大鼠局灶性腦缺血再灌注神經(jīng)元起到保護(hù)作用。
【圖文】：

組神經(jīng)功能無明顯差異。（二）TTC 染色腦梗死體積結(jié)果因大腦血流閉塞使腦組織出現(xiàn)或大或小的梗死是 MCAO 模型制備成功的標(biāo)志。TTC 可與正常組織內(nèi)的脫氧酶反應(yīng)而使未缺血組織呈紅色，但是缺血組織中的脫氧酶活性下降不能不能反應(yīng)，故不能產(chǎn)生反應(yīng)呈蒼白色。圖 1B 所示，Sham組 TTC 染色呈紅色，無梗死；余下各組均有蒼白色梗死灶。圖 1C、表 1 示，與sham 組比，余下各組中的梗死體積增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與 IR24h 組、Rg1+3MA 組比，Rg1 組的梗死體積降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IR24h 組與Rg1+3MA 組梗死體積無明顯差異。

14圖 2 電鏡下神經(jīng)元中自噬的超微結(jié)構(gòu)（箭頭所示為自噬體）三、mTOR 蛋白在各組間的表達(dá)結(jié)果圖 3A（免疫熒光結(jié)果）顯示，在大鼠腦組織頂葉中 mTOR 的陽性表達(dá)位于神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)中，下圖顯示為明亮的綠色熒光。NeuN 標(biāo)記神經(jīng)元細(xì)胞核，下圖顯示為明亮的紅色熒光標(biāo)記。DAPI 標(biāo)記細(xì)胞核，下圖顯示為明亮的藍(lán)色熒光標(biāo)記。結(jié)果(圖 3C)顯示，IR24h 組與 Rg1+3MA 組結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與 sham 組比，IR24h 組、Rg1 組、Rg1+3MA 組表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與 Rg1 組比，IR24h 組、Rg1+3MA 組表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。圖 3B（免疫印跡結(jié)果）顯示，，mTOR 在 sham 組呈現(xiàn)出較高的表達(dá)條帶，在IR24h 組、Rg1 組、Rg1+3MA 組的表達(dá)條帶減弱，其中在 Rg1 組的表達(dá)條帶最
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2604050