【摘要】：第一部分Orexin-2受體基因多態(tài)性與阿爾茨海默病的相關(guān)性研究目的探討orexin-2受體(OX2R)基因多態(tài)性與散發(fā)性阿爾茨海默病(LOAD)的相關(guān)性,同時分析其與食欲素水平、睡眠質(zhì)量、癡呆嚴(yán)重程度等臨床特征的關(guān)系方法本研究采用病例對照的研究方法,收集阿爾茨海默病患者350例為研究組,350例健康體檢者為對照組,收集其一般人口學(xué)資料。采集外周血樣本提取DNA,并統(tǒng)一檢測OX2R基因6個多態(tài)位點和Apo E的基因分型。同時檢測血清食欲素的水平。所有研究對象進(jìn)行簡易精神狀態(tài)檢查(MMSE)量表測定,研究組結(jié)合BPRS量表和CDR評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行癡呆程度分級。按照AD患者的睡眠特征,采用匹茨堡睡眠質(zhì)量指數(shù)(PSQI)量表和Epworth思睡(ESS)量表分別對患者的睡眠質(zhì)量及日間嗜睡程度進(jìn)行評估。所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。Hardy-Weinberg遺傳平衡定律用于分析抽樣基因型的群體代表性。正態(tài)分布的計量資料以sx±表示,兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗;計量數(shù)據(jù)資料兩組間比較采用卡方檢驗;以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用SNPStats在線軟件的多因素Logistic回歸模型評估5種遺傳模式下SNPs基因型與AD發(fā)生風(fēng)險的相關(guān)性。采用多因素Logistic回歸分析基因多態(tài)性及其他危險因素對AD發(fā)病的影響;采用配對連鎖不平衡軟件(Haploview4.2)分析單核苷酸多態(tài)性位點間的連鎖不平衡;采用Pearson系數(shù)評價血清食欲素水平與癡呆嚴(yán)重程度及睡眠質(zhì)量的相關(guān)性。結(jié)果1.中國北方漢族人群Apo E基因多態(tài)性與LOAD具有相關(guān)性,Apo E?4基因攜帶者患LOAD風(fēng)險明顯增高。2.OX2R基因rs2653349和rs2292041多態(tài)位點可能與LOAD相關(guān),但與嚴(yán)重程度可能不相關(guān)。這兩個位點的A等位基因可能是LOAD發(fā)生的危險因素。3.對所有因素進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,可見年齡、AD家族史、高血壓、Apo E?4基因及rs2653349(GA+AA)基因型是LOAD發(fā)病的獨立危險因素;單體型分析發(fā)現(xiàn)rs2653349+rs2292041 GA型?rs2653349+rs2292041+rs3122169GAA?ATC增加患病風(fēng)險。4.血漿食欲素水平在LOAD組中明顯升高,且與癡呆嚴(yán)重程度和睡眠質(zhì)量呈正相關(guān),rs2653349位點基因突變能導(dǎo)致食欲素水平升高。5.各SNP位點多態(tài)性與AD患者癡呆的嚴(yán)重程度不相關(guān);rs2653349和rs2292041位點多態(tài)性與AD患者睡眠質(zhì)量相關(guān)。結(jié)論中國北方漢族人群OX2R基因rs2653349和rs2292041多態(tài)位點可能與LOAD具有相關(guān)性,A等位基因可能是LOAD發(fā)生的易感因素。第二部分OX2R基因多態(tài)性的生物信息學(xué)分析目的探究OX2R基因多態(tài)性尤其是相關(guān)性位點對AD的影響機(jī)制,進(jìn)一步采用生物信息學(xué)工具對OX2R(HCRTR2)蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。對于相關(guān)性位點,重點通過對其進(jìn)行局部結(jié)構(gòu)建模以了解突變前后結(jié)構(gòu)的變化,并分析其變化對其功能可能的影響。方法采用生物信息學(xué)工具分析OX2R蛋白的理化性質(zhì),細(xì)胞定位,功能結(jié)構(gòu)域等特點,同時也對其二級結(jié)構(gòu)、拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析,采用QUARK軟件對基因多態(tài)性不同基因型對應(yīng)的氨基酸序列、蛋白結(jié)構(gòu)的差異進(jìn)行分析,并初步探討其功能差異影響阿爾茨海默病的機(jī)制。結(jié)果1.rs2653349(Val308Ile)位于該蛋白的第六個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域上,局部蛋白建模結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)其由Val變?yōu)镮le時,其結(jié)構(gòu)由無規(guī)則卷曲變?yōu)榱穗p螺旋結(jié)構(gòu),且折疊角度發(fā)生了顯著變化,結(jié)合位點結(jié)合面積變小,影響orexin與OX2R的結(jié)合以及對下游信號的傳導(dǎo),進(jìn)而引起Aβ淀粉樣沉積或睡眠-覺醒障礙,最終導(dǎo)致AD的發(fā)生發(fā)展。2.rs2292041位點位于第6個內(nèi)含子和第7個內(nèi)含子中間,更靠近第七個內(nèi)含子,離分支點較近。推測該位點發(fā)生突變可能導(dǎo)致剪接的異常,進(jìn)而產(chǎn)生錯誤的剪接序列,造成無功能或者無蛋白活性的m RNA。結(jié)論rs2653349位點多態(tài)性造成了蛋白結(jié)構(gòu)的改變,可能導(dǎo)致受體配體結(jié)合力下降或者結(jié)合后不能產(chǎn)生正常的下游信號;rs2292041位點多態(tài)性可能導(dǎo)致OX2R基因轉(zhuǎn)錄后剪接發(fā)生異常,造成OX2R的結(jié)構(gòu)及活性改變。
【圖文】：

連鎖不平衡分析圖

第一部分 Orexin-2 受體基因多態(tài)性與阿爾茨海默病的相關(guān)性研究3 LOAD 潛在診斷界值的食欲素水平預(yù)估血清食欲素的 ROC 曲線如圖 1.2 所示。從圖中可以計算出，血清食欲水線下面積為 0.669，可以作為健康人和 AD 患者的潛在區(qū)分指標(biāo)，計算得到佳閾值為 60.43，，同時曲線的特異性和敏感性分別為 59.14%和 66.86%。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R749.16;Q811.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 朱榮彥;郭鵬;張巍;;阿爾茨海默病與睡眠障礙[J];中華老年醫(yī)學(xué)雜志;2017年01期

2 杜怡峰;;應(yīng)加強(qiáng)我國阿爾茨海默病的早期防治研究[J];中華神經(jīng)科雜志;2016年09期

3 陳亞楠;朱飛;楊楠;左萍萍;李瑞生;郎森陽;王湘慶;;癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬中食欲素受體1隨時間演變的規(guī)律[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年02期

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本文編號：2597010