發(fā)布時(shí)間：2020-03-21 17:32

【摘要】：目的:本研究以慢性緊張型頭痛(Chronic Tension-type Headache,CTTH)為慢性疼痛疾病載體,以臨床對(duì)照試驗(yàn)為研究方法,觀察針刺得氣對(duì)臨床效應(yīng)的影響,同時(shí)采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)針刺得氣治療CTTH的差異表達(dá)基因進(jìn)行挖掘,嘗試從基因?qū)用鎸?duì)針刺得氣治療慢性疼痛的機(jī)制進(jìn)行闡釋。方法:1.臨床研究采用隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn),將納入的111例CTTH受試者隨機(jī)分為深刺組和淺刺組,接受8周共20次的針刺治療。研究周期共36周,其中,基線期4周,治療期8周,隨訪期24周。主要評(píng)價(jià)指標(biāo)為入組16周的受試者頭痛顯著改善率,次要指標(biāo)為受試者4周內(nèi)頭痛發(fā)作天數(shù)、頭痛平均強(qiáng)度和頭痛平均持續(xù)時(shí)間,以上指標(biāo)從基線期到隨訪結(jié)束均每4周評(píng)價(jià)一次,主要觀察時(shí)間點(diǎn)為入組16周。此外,采用哈佛大學(xué)麻省總醫(yī)院制定的MASS(the MGH Acupuncture Sensation Scale)在每次治療時(shí)對(duì)受試者得氣感進(jìn)行記錄,探究臨床效應(yīng)和得氣感之間的相關(guān)性。2.差異表達(dá)基因分析結(jié)合得氣感記錄和臨床效應(yīng)評(píng)價(jià)結(jié)果,分別選取深刺組中得氣感最強(qiáng)且達(dá)到頭痛顯著改善標(biāo)準(zhǔn)和淺刺組中得氣感最弱且未達(dá)到頭痛顯著改善標(biāo)準(zhǔn)的5例CTTH患者,并納入5例性別、年齡與之匹配的健康受試者參與本部分研究。采集CTTH患者治療前后和健康受試者空腹靜脈血,提取白細(xì)胞總核糖核酸(Total Ribonucleic Acid,Total RNA),采用BGISEQ-500測(cè)序儀對(duì)樣本進(jìn)行基因表達(dá)譜篩選。對(duì)篩選出的顯著差異表達(dá)基因進(jìn)行基因本體論(Gene Ontology,GO)功能注釋、京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Gene and Genomes,KEGG)通路富集分析,分析CTTH和針刺得氣治療相關(guān)的基因表達(dá)譜差異。結(jié)果:1.臨床研究(1)深、淺刺組臨床效應(yīng):兩組人口學(xué)資料和各評(píng)價(jià)指標(biāo)基線均衡,具有可比性(p0.05)。受試者頭痛顯著改善率,在入組8~32周(包括主要指標(biāo)觀察時(shí)間點(diǎn)入組16周)訪視中,深刺組均高于淺刺組(p0.05);4周內(nèi)頭痛發(fā)作天數(shù),在入組8~32周,深刺組均少于淺刺組(p0.05);4周內(nèi)頭痛平均強(qiáng)度在各訪視點(diǎn)兩組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);4周內(nèi)頭痛平均持續(xù)時(shí)間,入組28周,深刺組短于淺刺組(p0.05),其余各訪視點(diǎn)無明顯差異(p0.05)。(2)深、淺刺組得氣感評(píng)價(jià):各性質(zhì)得氣感出現(xiàn)頻次方面,深刺組脹感、深壓感出現(xiàn)頻次高于淺刺組(p0.01),刺痛感出現(xiàn)頻次低于淺刺組(p0.01);得氣感強(qiáng)度方面,深刺組MASS Index(MI)和脹感強(qiáng)度明顯高于淺刺組(p0.01),刺痛低于淺刺組(p0.01),其余各性質(zhì)針感無明顯差異(p0.05)。(3)得氣感影響因素:對(duì)可能引起得氣感差異的因素進(jìn)行初篩和驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),得氣感整體評(píng)價(jià)MI和以脹感為性質(zhì)的得氣感強(qiáng)度僅與深、淺刺分組具有顯著相關(guān)性(p0.001)。(4)得氣感與臨床效應(yīng)相關(guān)性:在本研究主要觀察時(shí)間點(diǎn)(入組16周),MI和脹感強(qiáng)度與受試者頭痛顯著改善情況呈正相關(guān)(p0.05);MI和脹感強(qiáng)度與4周內(nèi)頭痛天數(shù)減少率呈正相關(guān)(p0.05);脹感強(qiáng)度與4周內(nèi)頭痛平均強(qiáng)度減少率呈正相關(guān)(p0.05);酸感強(qiáng)度與受試者4周內(nèi)頭痛平均持續(xù)時(shí)間減少率呈正相關(guān)(p0.05),而刺痛與受試者4周頭痛平均持續(xù)時(shí)間減少率呈負(fù)相關(guān)(p0.05)。2.差異表達(dá)基因分析(1)與健康受試者相比,CTTH患者基因表達(dá)譜共存在327條差異表達(dá)基因,其中,上調(diào)59條,下調(diào)268條;通過針刺強(qiáng)得氣治療,CTTH疾病基因表達(dá)譜中有41條基因調(diào)控水平發(fā)生變化;經(jīng)針刺弱得氣治療,CTTH疾病基因表達(dá)譜中有18條基因調(diào)控水平發(fā)生變化;針刺強(qiáng)、弱得氣共同引起CTTH疾病相關(guān)的6條基因調(diào)控水平改變;針刺強(qiáng)得氣特有調(diào)控CTTH疾病相關(guān)基因共35條;針刺弱得氣特有調(diào)控基因12條。檢索NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)及查閱文獻(xiàn),篩選出可能與CTTH發(fā)病機(jī)制和針刺強(qiáng)得氣治療均密切相關(guān)的關(guān)鍵基因MTPN、CNTNAP3、CNTNAP3B和CD274,且經(jīng)qRT-PCR驗(yàn)證后結(jié)果一致。(2)GO功能注釋結(jié)果提示健康受試者和CTTH患者之間差異表達(dá)基因功能主要與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、趨化作用、細(xì)胞通訊、細(xì)胞黏附、細(xì)胞膜成分等相關(guān);CTTH患者經(jīng)針刺強(qiáng)得氣治療前后差異表達(dá)基因主要與細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路、細(xì)胞因子引起的細(xì)胞反應(yīng)和細(xì)胞因子應(yīng)答相關(guān);而針刺弱得氣治療前后差異表達(dá)基因未見明顯功能富集。(3)KEGG信號(hào)通路分析提示健康受試者與CTTH之間的差異基因顯著富集于13條通路,針刺強(qiáng)得氣治療前后的差異基因顯著富集于18條通路,比對(duì)方案中共有通路有1條,即:細(xì)胞黏附分子(cell adhesion molecules,CAMs);而針刺弱得氣治療前后差異基因富集于10條通路,但未發(fā)現(xiàn)與CTTH疾病基因富集相同的通路。結(jié)論:1.深刺治療CTTH的臨床效應(yīng)可能優(yōu)于淺刺,尤其在減少頭痛發(fā)作天數(shù)方面優(yōu)勢(shì)明顯,而在減輕頭痛強(qiáng)度、縮短頭痛持續(xù)時(shí)間方面可能無明顯優(yōu)勢(shì)。2.得氣感與深、淺針刺分組可能具有相關(guān)性,本試驗(yàn)的深刺組操作可能更易誘導(dǎo)出以脹感為性質(zhì)的較強(qiáng)得氣感。3.得氣感可能是影響針刺治療CTTH臨床效應(yīng)的關(guān)鍵因素。在減少頭痛天數(shù)和頭痛強(qiáng)度方面,整體強(qiáng)度相對(duì)較強(qiáng)、以脹感為性質(zhì)的得氣感可能療效更優(yōu);在縮短頭痛持續(xù)時(shí)間方面,以酸感為性質(zhì)的得氣感可能療效更優(yōu)。4.針刺強(qiáng)得氣可能對(duì)CTTH患者基因表達(dá)譜產(chǎn)生影響。MTPN、CNTNAP3、CNTNAP3B和CD274等基因的mRNA表達(dá)水平變化可能是CTTH發(fā)病的重要分子生物學(xué)機(jī)制,而針刺強(qiáng)得氣可能通過調(diào)控上述關(guān)鍵基因的表達(dá)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生臨床療效,但仍需進(jìn)一步的研究予以證實(shí)。
【圖文】：

臨床研究技術(shù)路線圖

針刺得氣治療慢性緊張型頭痛的臨床效應(yīng)及差異表達(dá)基因研究深、淺刺組受試者 4 周內(nèi)頭痛天數(shù)對(duì)比表 1-6 深、淺刺組受試者 4 周內(nèi)頭痛天數(shù)對(duì)比例數(shù)基線期 治療期 隨訪期入組 0 周 入組 4 周 入組 8 周 入組 12 周 入組 16 周 入組 20 周 入組 24 周 入組 28 周 56 20.00(16.00,28.00) 15.52(11.00,22.00)*9.00(5.00,20.00)*△7.50(2.90,15.75)*△9.00(3.00,13.78)*△◆8.85(0.22,15.00)*△◆6.00(0.00,14.89)*△◆5.55(0.00,14.41)*△◆ 55 25.00(17.00,8.00) 20.00(15.00,27.00)*16.00(9.00,25.00)*16.22(7.00,24.00)*△14.00(4.18,20.00)*△14.92(5.10,20.97)*△12.78(4.27,21.00)*△12.53(6.00,21.53)*△-1.853 -2.078 -2.167 -2.751 -2.105 -2.667 -3.122 -3.030 0.064 0.038 0.030 0.006 0.035 0.008 0.002 0.002 39 20.00(16.00,28.00) 15.00(12.00,22.00)*9.00(4.00,20.00)*△8.00(2.00,14.00)*△9.00(3.00,11.00)*△8.00(0.00,13.00)*△9.00(0.00,12.00)*△10.89(0.00,11.00)*△ 34 25.00(17.00,28.00) 20.5(14.00,27.00)*16.00(7.75,25.25)*18.00(3.75,25.00)*14.50(3.50,22.25)*△15.50(2.75,24.25)*△13.00(4.75,22.00)*△12.00(6.75,22.00)*△-1.333 -1.835 -2.066 -3.050 -2.066 -2.786 -2.755 -2.604 0.183 0.066 0.039 0.002 0.039 0.005 0.006 0.009 位數(shù)（P25，，P75）表示，*指與基線相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；△表示與入組 4 周相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；◆表示與入組 8 周相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。** ** * ****** **
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R246.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2593685