【摘要】：目的:套細胞淋巴瘤(MCL)是一種侵襲性B細胞非霍奇金淋巴瘤(NHL),預(yù)后差,中位生存期僅3-5年。MCL同時也是一種異質(zhì)性疾病,并非所有病例都呈侵襲性,約10-15%的MCL患者表現(xiàn)惰性病程。因此有必要探索MCL新的分子遺傳學(xué)標記及預(yù)后因素為治療策略提供依據(jù)。MCL特征性的分子學(xué)標志為t(11;14),導(dǎo)致了CCND1的高表達。預(yù)后因素目前國際最為常用的是套細胞淋巴瘤國際預(yù)后指數(shù)(MIPI)。此外,研究顯示P53基因異常與MCL患者的不良預(yù)后相關(guān),常見的P53基因異常包括基因突變和缺失,研究顯示P53基因突變和P53蛋白高表達高度相關(guān),因此可檢測蛋白表達反映基因突變情況。研究顯示有預(yù)后意義的另一指標是SOX11,但其在MCL中的預(yù)后價值結(jié)論不一致,部分研究顯示SOX11高表達與良好預(yù)后相關(guān),也有研究結(jié)論與之相反,提示可能存在復(fù)雜的混雜因素。研究顯示多種miRNA通過調(diào)節(jié)靶基因的表達在淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展中在起著重要作用,并影響疾病的預(yù)后。其中,miR-17-92,mi R-155,miR-150和miR-34a異常表達是B細胞腫瘤發(fā)生過程中的共同事件,miR-34a通過FOXP1及BCL2參與抑癌基因P53的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò),從而影響B(tài)細胞的分化和凋亡,在彌漫大B細胞淋巴瘤(BLBCL)等淋巴瘤中低表達并與預(yù)后相關(guān)。miR-155是第一個被證實可導(dǎo)致淋巴瘤發(fā)生的mi RNA,miR-155高表達與單克隆B淋巴細胞增多癥(MBL)向CLL轉(zhuǎn)化、CLL患者差的治療反應(yīng)、短生存期相關(guān)。本研究通過檢測75例MCL患者SOX11mRNA、miR-34a和mi R-155-5p表達以及P53基因異常,探討SOX11mRNA、miR-34a和miR-155-5p表達與P53基因異常和病理分型、分期、免疫表型、MIPI等預(yù)后指標的相關(guān)性,并研究其對生存的影響,以闡明SOX11mRNA、miR-34a和miR-155-5p表達和P53基因異常在MCL中的臨床價值。方法:1.采集75例MCL患者的詳細臨床資料,所有病例均進行電話隨訪,中位隨訪時間40(2-98)月。2.全部病例根據(jù)收集到的臨床資料重新復(fù)核MIPI,應(yīng)用國際通用的簡化sMIPI公式計算。3.使用組織陣列點樣儀制備組織芯片。4.免疫組化的方法檢測75例MCL的CCND1、Ki67、SOX11、P53的表達情況。5.熒光原位雜交的方法檢測75例MCL P53基因缺失情況。6.DNA測序法檢測25例MCL患者P53基因exon5-9的突變情況。7.熒光定量PCR的方法檢測75例MCL SOX11m RNA的表達水平。8.應(yīng)用生物信息數(shù)據(jù)庫TargetScan及miRdb預(yù)測可能調(diào)節(jié)SOX11基因表達的miRNA。9.熒光定量PCR的方法檢測75例MCL患者miR-155-5p和miR-34a的表達水平。10.多種統(tǒng)計學(xué)方法分析MCL患者SOX11mRNA的表達情況,SOX11mRNA與臨床病理特征和P53基因異常的相關(guān)性,MCL患者SOX11m RNA表達和P53基因異常的生存分析;MCL患者miR-155-5p和miR-34a的表達情況,miR-155-5p與臨床病理特征和SOX11mRNA的相關(guān)性,miR-34a與臨床病理特征和P53表達的相關(guān)性,MCL患者miR-155-5p和miR-34a表達的生存分析。結(jié)果:1.臨床特征:75例MCL患者中,男58例(77%),女17例(23%),發(fā)病年齡39-79歲,中位年齡63歲。診斷時ECOG2-4分48例(64%),Ann Arbor分期Ⅲ~Ⅳ期56例(75%),有B癥狀13例(17%),骨髓受侵22例(29%)。外周血白細胞≥10×109/L11例(15%),乳酸脫氫酶(LDH)升高者17例(23%),β2微球蛋白(β2-MG)升高者35例(47%)。MIPI低危組21例(28%),中危組31例(41%),高危組23例(31%)。2.病理形態(tài)學(xué)及免疫表性特征:形態(tài)表現(xiàn)為經(jīng)典套細胞型69例(92%),發(fā)生母細胞轉(zhuǎn)化6例(8%)。免疫組化陽性率依次為CyClinD1 100%(75/75),bcl-2 97%(66/68),CD5 82%(60/73),CD23 21%(15/72),Bcl-6 12%(8/69),Ki67≥30%29%(22/75)。SOX11+97%(73/75);。3.TP53基因異常:基因異常(突變和缺失)16/75(26%)例。4.熒光定量PCR檢測SOX11mRNA的表達:MCL患者SOX11mRNA水平3.097(1.311,6.216),對照組1.058(0.302,2.623),MCL患者SOX11mRNA的表達水平明顯高于淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者(p=0.00015)。5.SOX11mRNA表達與臨床病理特征及P53基因異常的相關(guān)性:5.1 SOX11mRNA表達與臨床病理特征的相關(guān)性SOX11mRNA表達水平在ECOG2分、骨髓正常的患者分別高于ECOG≥2分(P=0.0011)、骨髓浸潤(P=0.0038)的患者。SOX11mRNA表達在MIPI三組間有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0031),進一步進行多重比較,SOX11mRNA在低危組的表達分別高于中危組和高危組有統(tǒng)計學(xué)差異,而中危組與高危組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。5.2 SOX11mRNA表達與P53基因異常的相關(guān)性P53基因野生型組SOX11mRNA表達3.742(2.263,5.717),P53基因異常組3.778(1.386,6.921),兩組之間SOX11mRNA表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.6662)。6.MCL患者SOX11mRNA表達和P53基因異常及MIPI的生存分析:6.1 MCL患者SOX11mRNA表達的生存分析75例MCL患者中位生存時間為33(30-38)月,進一步將患者按照SOX11mRNA水平分為≥平均值(SOX11mRNA≥M)和平均值(SOX11mRNAM)兩組,SOX11mRNAM組中位生存時間短于SOX11m RNA≥M組,分別為27個月和50個月,兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。6.2 MCL患者P53基因異常的生存分析P53基因異常組中位生存時間為30個月,野生型組為37個月,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);進一步根據(jù)P53基因突變或缺失將患者分為四組:單突變組;單缺失組;同時突變?nèi)笔ЫM;突變?nèi)笔Ь幮越M;中位生存分別為30、25、31.5、37個月(P0.05)。生存最好的是雙陰性組,同時存在突變和缺失組最差。6.3 MCL患者SOX11mRNA聯(lián)合P53基因異常的生存分析聯(lián)合SOX11mRNA水平與P53基因異常,將患者分為4組:P53abeSOX11mRNA≥M;P53abeSOX11m RNAM;P53wtSOX11mRNA≥M;P53wtSOX11mRNAM;生存最好的是P53wt SOX11m RNA≥M組,P53abeSOX11mRNAM組最差。6.4 MCL患者MIPI及聯(lián)合SOX11mRNA生存分析MIPI低危組中位生存時間44個月,中危組31個月,高危組30月,低危組與高危組之間有統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.0033),而低危組與中危組、中危組與高危組之間均無統(tǒng)計學(xué)差異,但進一步將低危、中危、高危三組按照SOX11m RNA表達分別再分為SOX11mRNAM和SOX11mRNA≥M兩組,在低危、中危及高危組三組內(nèi),SOX11mRNAM患者的生存時間均短于SOX11mRNA≥M患者(P0.05)。7.熒光定量PCR檢測miR-34a和miR-155-5P的表達:MCL中miR-34a表達0.478(0.202,0.821),對照組RHF 0.572(0.265,1.072),二組間無顯著性差異(P=0.335)。MCL患者mi R-155-5P表達3.482(2.136,5.048),對照組RHF0.774(0.083,1.834),MCL患者miR-155-5P表達顯著高于RHF(P0.001)。8.miR-34a和miR-155-5P表達與臨床病理特征的相關(guān)性:8.1 miR-34a表達與臨床病理特征的相關(guān)性ECOG≥2組患者miR-34a表達0.385(0.184,0.69),ECOG2組0.768(0.228,0.976),ECOG≥2組的表達顯著低于ECOG2組(P=0.0214);SOX11m RNAM組miR-34a表達0.162(0.107,0.362),SOX11mRNA≥M組0.503(0.219,0.886),SOX11mRNAM組的表達顯著低于SOX11mRNA≥M組(P=0.0309)。8.2 miR-155-5P表達與臨床病理特征的相關(guān)性MIPI低危組miR-155-5P表達3.031(1.27,3.643),中危組4.438(2.99,5.296),高危組4.438(2.704,5.134),三組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.0432),進一步采用Nemenyi法進行多重比較,低危組表達分別低于高危組和中危組,有統(tǒng)計學(xué)差異,而中危組與高危組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。9.MCL患者miR-34a和miR-155-5P表達的生存分析:9.1 MCL患者miR-34a表達的生存分析根據(jù)miR-34a的表達水平將患者分為大于等于平均值(miR-34a≥M)和小于平均值(miR-34aM)兩組,前者中位生存時間為39月,后者為28個月,基于log-rank檢驗結(jié)果,兩組生存時間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.0049)。9.2 MCL患者miR-155-5p表達的生存分析根據(jù)miR-155-5p的表達水平將患者分為大于等于平均值(miR-155-5p≥M)和小于平均值(mi R-155-5pM)兩組,前者中位生存時間為31月,后者為36個月,基于log-rank檢驗結(jié)果,兩組生存時間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.0281)。10.預(yù)后單因素及多因素分析:單因素分析,以α=0.05水準,與較差生存相關(guān)的預(yù)后因素有病理形態(tài)發(fā)生母細胞轉(zhuǎn)化、ECOG≥2、P53基因異常、骨髓浸潤、MIPI高危組及SOX11m RNAM、miR-34aM和miR-155-5p≥M。多因素分析與預(yù)后不良相關(guān)的因素為母細胞轉(zhuǎn)化、MIPI高危組及SOX11m RNAM。結(jié)論:1.MCL患者SOX11mRNA表達顯著高于正常對照;與SOX11mRNAM相比,SOX11mRNA≥M是良好的預(yù)后因素,與更長的生存相關(guān),聯(lián)合MIPI或P53表達情況,可能更好的判斷預(yù)后。2.雖然多因素分析miR-34aM和miR-155-5p≥M被預(yù)后模型剔除,但單因素分析miR-34aM組和miR-155-5p≥M組生存顯著差于miR-34a≥M組和miR-155-5pM,提示miR-34a和miR-155-5p表達也有可能與MCL預(yù)后相關(guān),更準確的結(jié)論依賴于進一步大樣本的研究。
【圖文】：

2.3 miR-34a 和 miR-155-5P 在 MCL 患者中的表達應(yīng)用熒光定量PCR檢測miR-34a和 miR-155-5P的表達水平，以U6做內(nèi)參進行擴增（圖1A,圖1B,圖1C）。檢測結(jié)果采用Shapiro-Willk 正態(tài)性檢驗，miR34與miR155均為非正態(tài)分布(其中miR34: W=0.8794, P<0.0001; miR155: W=0.6139, P<0.0001)。因此實驗組與對照組關(guān)于miR34與miR155的差異性比較均采用Wilcoxon秩和檢驗。MCL患者miR-34a表達0.478（0.202,0.821），對照組RHF 0.572（0.265,1.072），二組間無顯著性差異（P=0.335）。MCL患者miR-155-5P表達3.482（2.136,5.048）, 對照組RHF0.77（0.083,1.834），MCL患者miR-155-5P表達顯著高于RHF患者（P＜0.001）（表1）。圖 1A U6 擴增圖

2.3 miR-34a 和 miR-155-5P 在 MCL 患者中的表達應(yīng)用熒光定量PCR檢測miR-34a和 miR-155-5P的表達水平，以U6做內(nèi)參進行擴增（圖1A,圖1B,圖1C）。檢測結(jié)果采用Shapiro-Willk 正態(tài)性檢驗，miR34與miR155均為非正態(tài)分布(其中miR34: W=0.8794, P<0.0001; miR155: W=0.6139, P<0.0001)。因此實驗組與對照組關(guān)于miR34與miR155的差異性比較均采用Wilcoxon秩和檢驗。MCL患者miR-34a表達0.478（0.202,0.821），對照組RHF 0.572（0.265,1.072），，二組間無顯著性差異（P=0.335）。MCL患者miR-155-5P表達3.482（2.136,5.048）, 對照組RHF0.77（0.083,1.834），MCL患者miR-155-5P表達顯著高于RHF患者（P＜0.001）（表1）。圖 1A U6 擴增圖
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R733.1

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本文編號：2593547