【摘要】：目的:通過(guò)消痔靈溶液前列腺內(nèi)注射法,建立有效的SD大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎的動(dòng)物模型;測(cè)定大鼠的血液學(xué)指標(biāo)研究其生物學(xué)特性,并應(yīng)用RNA-seq測(cè)序技術(shù)篩選出差異表達(dá)基因,然后對(duì)有意義的信號(hào)通路基因進(jìn)行驗(yàn)證分析,初步探討慢性非細(xì)菌性前列腺炎發(fā)生發(fā)展可能的作用機(jī)制。方法:1.將30只體重在200-250g的健康的雄性SD大鼠隨機(jī)分成3組,每組10只,分別為正常組,假手術(shù)組,造模組。2.建立動(dòng)物模型:采用消痔靈前列腺內(nèi)注射法建立有效的慢性非細(xì)菌性前列腺炎動(dòng)物模型。3.觀察前列腺組織病理學(xué)變化,評(píng)價(jià)造模成功與否。測(cè)定血清中的Ca~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)、Ig G、CRP、睪酮含量,觀察生物學(xué)特性的變化情況。4.應(yīng)用RNA-seq技術(shù)對(duì)大鼠前列腺RNA進(jìn)行測(cè)序,篩選出表達(dá)差異的mRNA。5.應(yīng)用DIVAD、KEGG對(duì)差異顯著表達(dá)的基因進(jìn)行KEGG通路分析以及GO功能注釋分析,確定差異表達(dá)基因所參與的生物學(xué)通路。6.應(yīng)用western blot、RT-PCR等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證關(guān)鍵信號(hào)通路中差異基因的表達(dá)水平,比較兩組中差異因子的表達(dá)情況。結(jié)果:1.在SD大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎動(dòng)物模型中,大鼠前列腺組織部分腺腔破壞明顯,間質(zhì)有成纖維細(xì)胞增生,淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤(rùn),呈現(xiàn)明顯的慢性炎癥表現(xiàn)。2.與正常組相比,假手術(shù)組各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)量均無(wú)明顯差異(P0.05)。造模組的大鼠的血液白細(xì)胞、血清Mg~(2+)、睪酮升高,但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。造模組的大鼠血清Zn~(2+)較正常組及假手術(shù)組降低,但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。造模組大鼠血清Ca~(2+)、血清Ig G、血清CRP明顯高于正常組及假手術(shù)組(P0.05)。3.RNA-seq測(cè)序篩選出5425個(gè)差異基因,以log2(Fold Change)絕對(duì)值大于1且P0.05為標(biāo)準(zhǔn)的方法,進(jìn)一步篩選得到129個(gè)表達(dá)差異顯著的基因,其中上調(diào)基因103個(gè),下調(diào)基因26個(gè)。4.將差異表達(dá)的基因進(jìn)行GO富集分析,顯著富集的GO功能類別分別是:正向調(diào)節(jié)生物過(guò)程、對(duì)刺激反應(yīng)的調(diào)節(jié)、細(xì)胞成分組織的調(diào)節(jié)、免疫系統(tǒng)進(jìn)程、細(xì)胞成分組織或生物發(fā)生、防御反應(yīng)、對(duì)外部刺激的反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、傷口愈合、免疫反應(yīng)等。顯著富集的通路有代謝途徑、PI3K-Akt信號(hào)通路、癌癥通路、IL-17信號(hào)通路、緊密連接、Jak-STAT信號(hào)通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工、癌癥中的蛋白多糖、TNF信號(hào)通路、白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移、吞噬體、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架、AMPK信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)等若干。5.造模組較對(duì)照組IL17信號(hào)通路中CXCL1、CXCL3、CCL2、CCL7、IL6、COX2、LCN2、MMP3的表達(dá)量增高,USP25表達(dá)量降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.消痔靈注射大鼠前列腺內(nèi),造模60天可以成功制作大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎動(dòng)物模型。2.Ca~(2+)、Ig G、CRP在慢性非細(xì)菌性前列腺炎發(fā)病過(guò)程中有明顯的改變。3.IL17信號(hào)通路中CXCL1、CXCL3、CCL2、CCL7、IL6、COX2、LCN2、MMP3、USP25等9個(gè)基因在慢性非細(xì)菌性前列腺炎發(fā)生發(fā)展中表達(dá)有顯著差異,說(shuō)明這些因子可能參與了該病的發(fā)病過(guò)程,為進(jìn)一步研究慢性非細(xì)菌性前列腺炎的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

基于 RNA-seq 技術(shù)的 IL17 通路差異基因在慢性非細(xì)菌性前列腺炎中的表達(dá)及意義 2015 級(jí)碩士學(xué)位畢業(yè)論文3.3 SD 大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎模型前列腺組織大體變化肉眼觀察來(lái)看，正常組與生理鹽水組大鼠前列腺肉眼觀察無(wú)明顯差異，前列腺與周圍組織無(wú)黏連容易剝離，腺體形狀略扁，，表面光滑，無(wú)結(jié)節(jié)，腺體本身質(zhì)地柔軟，左右大小均一。消痔靈組大鼠前列腺組織與周圍結(jié)締組織有黏連，表面欠光滑，不宜剝離。腺體表面粗糙，整體呈暗黑色，質(zhì)硬，腺體與正常組及生理鹽水對(duì)照組相比，腺體大小微小，見圖 1-1。

基于 RNA-seq 技術(shù)的 IL17 通路差異基因在慢性非細(xì)菌性前列腺炎中的表達(dá)及意義 2015 級(jí)碩士學(xué)位畢業(yè)論文細(xì)胞浸潤(rùn)，未見組織水腫。消痔靈組大鼠前列腺腺泡壁破壞，血管增生，可見間質(zhì)水腫，間質(zhì)內(nèi)彌漫大量的淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞，以淋巴細(xì)胞為主，局部組織可見組織增生，如圖 1-2 所示。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R697.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2591132