【摘要】：目的構(gòu)建真核重組質(zhì)粒N2ICD/p CMV-Tag4并轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)。方法根據(jù)GenBank上Notch2的NICD序列設(shè)計(jì)引物,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法從人宮頸癌細(xì)胞Hela細(xì)胞擴(kuò)增人Notch2受體胞內(nèi)區(qū)基因(N2ICD),酶切和測序鑒定后克隆至攜帶FLAG標(biāo)簽的真核表達(dá)載體pCMV-Tag4并進(jìn)行瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞,熒光定量PCR(Q-PCR)和蛋白印跡(WB)檢測目的蛋白的表達(dá)。結(jié)果通過RT-PCR克隆獲得人N2ICD基因并成功構(gòu)建重組質(zhì)粒N2ICD/pCMV-Tag4,目的蛋白N2ICD在HEK 293T細(xì)胞中獲得表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)N2ICD的HEK 293T細(xì)胞株,為進(jìn)一步探討Notch2受體的功能奠定基礎(chǔ)。

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