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鹽芥RAV基因家族在擬南芥中的過量表達(dá)及功能驗(yàn)證

發(fā)布時(shí)間:2020-02-03 06:12
【摘要】:RAV(Related to ABI3/VP1)轉(zhuǎn)錄因子含有AP2結(jié)構(gòu)域和B3結(jié)構(gòu)域,是高等植物體內(nèi)具有多種功能的一類轉(zhuǎn)錄因子。盡管RAV基因家族在棉花、大豆和擬南芥等多種植物中已有一定程度的研究,但對(duì)鹽生模式植物鹽芥RAV基因家族的研究尚且沒有。本文分離得到了鹽芥全基因組中的8個(gè)Ts RAV基因,并根據(jù)生物信息學(xué)分析將其分成兩組(A組,B組),A組成員為Ts RAV1-Ts RAV4,B組成員為Ts RAV5-Ts RAV8。實(shí)時(shí)定量分析發(fā)現(xiàn)鹽芥種子播種后0 d到4 d過程中8個(gè)Ts RAV表達(dá)水平一直呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。通過對(duì)鹽芥幼苗進(jìn)行Na Cl和ABA脅迫處理,分別分析根和葉中的Ts RAV基因表達(dá)水平發(fā)現(xiàn),A-Ts RAVs基因中Ts RAV2、Ts RAV3的表達(dá)受到Na Cl明顯的抑制,B-Ts RAVs(Ts RAV5-Ts RAV8)的表達(dá)水平極低且對(duì)Na Cl脅迫不敏感;鹽芥A-Ts RAVs基因和B-Ts RAVs基因?qū)BA脅迫的應(yīng)答不同,外源ABA抑制了Ts RAV1、2、3基因的表達(dá);而B-Ts RAVs基因雖然在無ABA脅迫時(shí)表達(dá)量極低,但是在葉中還是受到ABA短暫的誘導(dǎo),表達(dá)量出現(xiàn)瞬時(shí)增長(zhǎng)。對(duì)35S:Ts RAVs轉(zhuǎn)基因擬南芥在Na Cl、ABA及干旱脅迫下的應(yīng)答進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),隨著Na Cl濃度的增加,35S:Ts RAVs轉(zhuǎn)基因株系受到的抑制越來越顯著,且在不同鹽濃度下35S:A-Ts RAVs(35S:Ts RAV1-Ts RAV4)株系發(fā)芽率均低于35S:B-Ts RAVs(35S:Ts RAV5-Ts RAV8)株系;外源ABA對(duì)35S:Ts RAVs株系種子萌發(fā)起抑制作用,且35S:A-Ts RAVs株系受到的抑制程度較35S:B-Ts RAVs株系更強(qiáng);野生型(WT)、35S:A-Ts RAVs及35S:B-Ts RAVs株系幼苗在根的生長(zhǎng)方面受外源ABA的抑制程度無顯著差異;由于35S:A-Ts RAVs株系在0.5μM ABA脅迫環(huán)境中黃子葉較WT和B-Ts RAVs株系多,推測(cè)A-Ts RAVs基因可能與ABA調(diào)控的光合作用和葉片衰老相關(guān);35S:A-Ts RAVs株系在干旱條件下,影響氣孔的關(guān)閉活動(dòng),因此推測(cè)A-Ts RAVs(Ts RAV1-Ts RAV4)基因是植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中的負(fù)調(diào)節(jié)因子,且A-Ts RAVs較B-Ts RAVs(Ts RAV5-Ts RAV8)起到更強(qiáng)的負(fù)調(diào)節(jié)作用。本文首次對(duì)鹽生模式植物鹽芥的RAV基因家族進(jìn)行了鑒定與功能分析,是對(duì)RAV轉(zhuǎn)錄因子家族功能研究的重要補(bǔ)充。
【圖文】:

序列,基因家族,氨基酸,位置


例如,在擬南芥及大豆中,TEM1 和 GmRAV 分別通過結(jié)合和抑制 FT基因的啟動(dòng)子而抑制開花[90]。從圖 2-1 很明顯地可以看出,每個(gè) A-TsRAVs( TsRAV1-TsRAV4 ) 基 因 都 含 有 核 定 位 序 列 ( NLS ) , 而 B-TsRAVs(TsRAV5-TsRAV8)不含該序列,因此推測(cè)核定位序列的有無對(duì) RAV 轉(zhuǎn)錄因子的功能起到至關(guān)重要的作用。除了 BRD 結(jié)構(gòu)域外,對(duì) A-TsRAVs 和 B-TsRAVs 進(jìn)行蛋白序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)兩組基因蛋白序列在高度保守區(qū)域出現(xiàn)個(gè)別氨基酸的變化,變化較顯著的有:A-TsRAVs 在圖中第一、二位為非極性的脯氨酸,第七位為非極性的纈氨酸,第九位非極性的苯丙氨酸,第十二位為極性谷氨酸,第十三位為非極性亮氨酸,第十四位為極性天冬酰胺,十八、十九位為極性絡(luò)氨酸,二十一位為非極性丙氨酸。而 B-TsRAVs 依次為極性的谷氨酸,極性的天冬酰胺,極性的精氨酸,非極性纈氨酸,極性谷氨酸,非極性纈氨酸,非極性苯丙氨酸,極性谷氨酸;如圖 2-2 所示,這種組間的差異可能會(huì)影響 RAV 蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)及 DNA 結(jié)合能力和活性。

示意圖,鹽芥,基因家族,擬南芥


圖 2-5 鹽芥和擬南芥 RAV 基因家族 Motif 分析示意圖Fig.2-5 Schematic illustrations of the types and distributions of motifs for each TsRAV familymembers and AtRAVs with a same group符合篩選條件(e-value<1e-7)的有 17 個(gè)保守的 Motif。位于 AP2 結(jié)構(gòu)域前的 Motif5、Motif12,,位于 B3 結(jié)構(gòu)域內(nèi)部的 Motif 9 以及在 C 端的 Motif8 都A組基因特有的保守結(jié)構(gòu),AP2結(jié)構(gòu)域內(nèi)部的Motif 10、B3結(jié)構(gòu)域內(nèi)部的Mot、Motif 16 及在 BRD 結(jié)構(gòu)域前端的 Motif 14 只存在于 B 組基因結(jié)構(gòu)中。由上比較可見 Motif的種類和分布出現(xiàn)明顯的分組現(xiàn)象。2.3.5 擬南芥和鹽芥 RAV 基因家族信號(hào)肽分析信號(hào)肽可以引導(dǎo)分泌性蛋白質(zhì)穿過其合成所在的細(xì)胞,進(jìn)入到其他細(xì)胞中發(fā)作用,因此信號(hào)肽對(duì)蛋白分泌的過程有非常重要的作用。信號(hào)肽位于外分泌蛋的 N 端,當(dāng)新合成的含有信號(hào)肽的多肽通過轉(zhuǎn)運(yùn)途徑進(jìn)入到糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上繼合成蛋白的時(shí)候,其 N 端的信號(hào)肽結(jié)構(gòu)被切除。信號(hào)肽的長(zhǎng)度一般是 10-4
【學(xué)位授予單位】:天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:Q943.2

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本文編號(hào):2575928

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