【摘要】：本研究旨在克隆從江香豬FoxO 4基因編碼區(qū)序列,對FoxO 4基因功能進(jìn)行初步探究。采用qRT-PCR技術(shù)對從江香豬(6月齡)不同組織中FoxO 4基因的相對表達(dá)量進(jìn)行檢測;PCR擴(kuò)增FoxO 4基因CDS區(qū),構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-N3-FoxO 4;利用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒pEGFP-N3-FoxO 4瞬時轉(zhuǎn)染從江香豬皮下脂肪前體細(xì)胞,通過qRT-PCR方法,檢測FoxO 4、PPARγ、LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL的表達(dá)水平。結(jié)果顯示:FoxO 4基因在從江香豬脂肪組織中表達(dá)量最高;構(gòu)建的重組真核表達(dá)載體pEGFP-N3-FoxO 4在從江香豬皮下脂肪前體細(xì)胞中成功表達(dá),與對照組相比,LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL基因的表達(dá)均顯著上調(diào)。綜上表明,FoxO 4對脂質(zhì)代謝具有一定的調(diào)控作用,可能是影響從江香豬豬肉品質(zhì)的重要候選基因,為進(jìn)一步了解從江香豬脂肪沉積機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

ｏｂｖｉｏｕｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｂｙｔｈｅｓａｍｅｌｅｔｔｅｒ（Ｐ＞０．０５）圖１ＦｏｘＯ４基因ｍＲＮＡ在從江香豬不同組織中的相對表達(dá)Ｆｉｇ．１ＴｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＦｏｘＯ４ｇｅｎｅｉｎｄｉｆｆｅｒ－ｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓｏｆＣｏｎｇｊｉａｎｇＸｉａｎｇｐｉｇＭ．ＤＬ５０００ｍａｒｋｅｒ；１～３．?dāng)U增的ＦｏｘＯ４Ｍ．ＤＬ５０００ｍａｒｋｅｒ；１－３．ＴｈｅＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｏｘＯ４圖２ＦｏｘＯ４基因的ＰＣＲ擴(kuò)增Ｆｉｇ．２ＴｈｅＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｏｘＯ４ｇｅｎｅＭ．ＤＬ５０００ｍａｒｋｅｒ；１～４．?dāng)U增的ＦｏｘＯ４產(chǎn)物Ｍ．ＤＬ５０００ｍａｒｋｅｒ；１－４．ＴｈｅＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｏｘＯ４圖３ＦｏｘＯ４基因的菌液ＰＣＲ擴(kuò)增Ｆｉｇ．３ＴｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｏｘＯ４ｇｅｎｅ條帶：大小約為４７００ｂｐ的ｐＥＧＦＰ－Ｎ３載體片段和１５３９ｂｐ的目的基因ＦｏｘＯ４片段。結(jié)果表明，ｐＥＧＦＰ－Ｎ３－ＦｏｘＯ４重組質(zhì)粒構(gòu)建成功（圖４）。２．５真核表達(dá)載體ｐＥＧＦＰ－Ｎ３－ＦｏｘＯ４的測序鑒定通過測序進(jìn)一步驗證，將測序結(jié)果與ＮＣＢＩ中Ｍ．ＤＬ１５０００ｍａｒｋｅｒ；１、２．重組質(zhì)粒ｐＥＧＦＰ－Ｎ３－ＦｏｘＯ４的雙酶切Ｍ．ＤＬ１５０００ｍａｒｋｅｒ；１，２．ＤｏｕｂｌｅｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｐＥＧＦＰ－Ｎ３－ＦｏｘＯ４圖４ｐＥＧＦＰ－

Ｃ．１０ｄ圖５皮下脂肪前體細(xì)胞的原代、傳代培養(yǎng)（１００×）Ｆｉｇ．５Ｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｏｆｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅ（１００×）Ａ．誘導(dǎo)培養(yǎng)２４ｈ（１００×）；Ｂ．誘導(dǎo)培養(yǎng)１４４ｈ（１００×）；Ｃ．油紅Ｏ染色（２００×）Ａ．Ｉｎｄｕｃｅｄｃｕｌｔｕｒｅ２４ｈ（１００×）；Ｂ．Ｉｎｄｕｃｅｄｃｕｌｔｕｒｅ１４４ｈ（１００×）；Ｃ．ＯｉｌｒｅｄＯｓｔａｉｎｉｎｇ（２００×）圖６皮下脂肪前體細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及鑒定Ｆｉｇ．６ＩｎｄｕｃｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｔａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅＡ．空白對照；Ｂ．陰性對照；Ｃ．重組質(zhì)粒ｐＥＧＦＰ－Ｎ３－ＦｏｘＯ４Ａ．Ｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；Ｃ．ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｏｆｐＥＧＦＰ－Ｎ３－ＦｏｘＯ４圖７皮下脂肪前體細(xì)胞的轉(zhuǎn)染（１００×）Ｆｉｇ．７Ｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｆｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅ（１００×）ＡＴＧＬ基因的表達(dá)水平上調(diào)，極顯著高于陰性對照組（Ｐ＜０．０１）；ＨＳＬ的表達(dá)水平也上調(diào)，顯著高于陰性對照組（Ｐ＜０．０５），，ＰＰＡＲγ的表達(dá)水平在轉(zhuǎn)染前后差異不顯著（Ｐ＞０．０５）（圖８）。３討論本研究采用ｑＲＴ－ＰＣＲ方法對ＦｏｘＯ４基因在從江香豬心、肝、脾、肺、腎、大腸、小腸、背最長饑脂２２７３

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