【摘要】：目的:甲狀腺癌近年來發(fā)病率增長迅速,已成為增長較快的實(shí)體腫瘤之一,分化型甲狀腺癌(differentiated thyroid carcinomas,DTC)占甲狀腺癌(thyroid carcinomas,TC)的85-90%,而且分化型甲狀腺癌的增長速度占甲狀腺癌增速的絕大部分。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,甲狀腺癌在分子水平的研究日益受到人們的重視,研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌與Braf基因突變、Ret/PTC重組、Ras點(diǎn)突變、PAX8/PPARγ基因重組以及Na+/I-Symporter(NIS)基因突變具有一定關(guān)系。NIS基因在甲狀腺攝碘功能中起著關(guān)鍵作用,在甲狀腺癌分化過程中,可能由于其去分化作用引起NIS基因突變,導(dǎo)致攝碘功能喪失,在放射碘治療療效較差方面起到一定的作用。本試驗(yàn)擬在研究并分析分化型甲狀腺癌患者NIS基因突變的類型和特點(diǎn),并對其基因類型-表現(xiàn)型的關(guān)系進(jìn)行初步探討,為DTC患者的基因診斷和基因治療及預(yù)后分析提供一定的理論依據(jù)。方法:按照僅有甲狀腺腫瘤病史,無其他惡性腫瘤病史,術(shù)前未行甲狀腺放射治療及相關(guān)治療的選擇標(biāo)準(zhǔn),選取于2016.04-2016.07在青島大學(xué)附屬醫(yī)院行甲狀腺癌手術(shù)治療,并經(jīng)兩位病理醫(yī)師確認(rèn)的100例DTC患者作為研究對象,從患者癌組織及正常組織中提取基因組DNA,采用PCR擴(kuò)增和直接測序的方法對NIS基因全部外顯子及一部分臨近內(nèi)含子進(jìn)行基因突變的檢測。通過卡方檢驗(yàn)對檢測到的基因突變的頻率進(jìn)行分析,p0.5為癌組織組和正常組織組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn),通過生物信息學(xué)對所得到的基因突變進(jìn)行基因突變位點(diǎn)危險(xiǎn)性分析。結(jié)果:在1例患者中發(fā)現(xiàn)位于NIS基因第14外顯子的一個(gè)錯(cuò)義突變(c.1663CT,p.Arg555Cys)位點(diǎn),在2例患者癌組織中發(fā)現(xiàn)位于NIS基因第10外顯子的一個(gè)同義基因突變(c.1571 CT,p.Leu408=)位點(diǎn),在1例患者中發(fā)現(xiàn)位于NIS基因第8外顯子發(fā)現(xiàn)一個(gè)同義基因突變(c.1224CT,p.Leu408=)位點(diǎn)。在編號9、13、27、35、41、42的癌組織第1內(nèi)含子發(fā)現(xiàn)一個(gè)SNP:rs740695(c.-1207CT)位點(diǎn);在編號1號的患者癌組織第5內(nèi)含子發(fā)現(xiàn)一個(gè)SNP突變位點(diǎn)rs185045651(c.332+52GA);在編號4、18、46、61、89患者癌組織第6內(nèi)含子發(fā)現(xiàn)一個(gè)SNP突變位點(diǎn)rs182064161(c.839+11CT);在編號10、23、24、58患者癌組織第14內(nèi)含子發(fā)現(xiàn)一個(gè)SNP突變位點(diǎn)rs148626179(c.1767+23AC);在編號31、86號患者癌組織第14內(nèi)含子同時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)SNP位點(diǎn)rs4808709(1767+29AG)。其他癌組織及全部正常組織中未發(fā)現(xiàn)基因突變。兩組組織經(jīng)卡方檢驗(yàn)(p0.05)比較,基因突變頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:在統(tǒng)計(jì)學(xué)方面,癌組織組與正常組織基因突變頻率經(jīng)卡方檢驗(yàn),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在生物信息學(xué)方面,通過運(yùn)用polyphen-2程序?qū)Πl(fā)現(xiàn)的錯(cuò)義突變(c.1663CT,p.Arg555Cys)進(jìn)行危險(xiǎn)度分析,運(yùn)算值為1,運(yùn)用SIFT評分,分值為0分,提示該突變對于NIS基因所編碼的NIS蛋白具有較大危險(xiǎn)性。該患者是一個(gè)51歲的老年女性,術(shù)后病理示甲狀腺乳頭狀癌,腫瘤直徑0.7 cm,有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,癌灶呈多灶性,甲功五項(xiàng)未見明顯異常,基因型和表型關(guān)系仍不明顯。NIS基因突變可能與青島地區(qū)分化型甲狀腺癌的相關(guān)性不明顯,該錯(cuò)義突變在甲狀腺攝碘過程中可能起到一定作用,具體功能仍待下一步細(xì)胞功能學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證。發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)同義突變(c.1571 CT,p.Leu 408=)和(c.1224CT,p.Leu408=),盡管密碼子發(fā)生變化,但是兩組密碼子均編碼亮氨酸,不能引起NIS蛋白功能發(fā)生變化。基因型和表現(xiàn)型的關(guān)系尚不明確,仍待進(jìn)一步研究。
【圖文】：

培清JS-780全自動凝膠成像分析儀掃描下可見所擴(kuò)增目的片段條帶單一清晰，擴(kuò)增產(chǎn)物長度同所設(shè)計(jì)各片段大小預(yù)期值基本符合，并將擴(kuò)增產(chǎn)物送至青島擎科梓熙生物技術(shù)有限公司進(jìn)行直接測序。（圖1）M圖 1： NIS 基因第 9、10 外顯子部分?jǐn)U增產(chǎn)物電泳條帶（部分電泳條帶）注：從左至右，第 1 泳道為 DNA marker I,第 2-9 泳道分別為外顯子 9、10 擴(kuò)增產(chǎn)物在第 3、4、5、6、11、12、13、14 號患者病例中的擴(kuò)增情況。左邊標(biāo)示為 DNA markerI 的電泳條帶大小，條帶大小從下到上依次是 100kb、200kb、300kb、400kb、500kb、600kb、700kb。2.2 NIS 基因所有外顯子 DNA 測序結(jié)果對100 例 DTC 患者的癌組織及正常組織均進(jìn)行 NIS 基因所有外顯子 DNA 測

（rs740695,rs185045651,rs182064161,rs148626179, rs4808709）。在100例患者的正常甲狀腺組織中均未發(fā)現(xiàn) NIS 基因的突變。所發(fā)現(xiàn)的錯(cuò)義突變（c.1663C>T (p.Arg555Cys)）位于第14外顯子(見圖2)，該錯(cuò)義突變是從一個(gè)51歲的老年女性患者甲狀腺乳頭狀癌癌組織中發(fā)現(xiàn)的，該突變使NIS蛋白第555位的氨基酸殘基由精氨酸變?yōu)榘腚装彼帷＞彼崾且环N脂肪族的堿性含有胍基的極性α氨基酸，在生理?xiàng)l件下帶正電荷，而半胱氨酸是一種脂肪族的含巰基的極性α氨基酸，在中性或堿性溶液中易被空氣氧化成胱氨酸。因而，由半胱氨酸替代精氨酸后，NIS蛋白局部穩(wěn)定性不再同之前一樣，，可能易導(dǎo)致該蛋白功能發(fā)生改變。該患者術(shù)后病理示，腫瘤直徑＜2cm
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R736.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 戴維德;韓秀婕;井慶紅;王川予;郭發(fā)金;馬衛(wèi)華;;超聲引導(dǎo)下粗針穿刺活檢在甲狀腺疾病診斷中的應(yīng)用[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年08期

本文編號：2566130