【摘要】：利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化方法,將轉(zhuǎn)錄因子HD-Zip家族基因Gm01g04890分別導(dǎo)入測(cè)序品種Willimas 82(W82)和小粒豆品種東農(nóng)50(DN50)兩種大豆品種的子葉節(jié)中.探討了種子萌發(fā)時(shí)間、農(nóng)桿菌菌液濃度、侵染條件、共培養(yǎng)時(shí)間和乙酰丁香酮(AS)濃度等因素對(duì)大豆子葉節(jié)形成不定芽的影響,優(yōu)化了大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化體系.T0代再生植株經(jīng)草銨膦篩選以及RT-PCR檢測(cè),Gm01g04890基因已成功轉(zhuǎn)入并整合于大豆基因組,獲得了轉(zhuǎn)Gm01g04890基因的DN50大豆抗性植株.
【圖文】：

ｈ的種子，尤其是Ｗ８２品種，在經(jīng)侵染共培養(yǎng)后存活下來(lái)的外植體個(gè)數(shù)較少，因而叢生芽誘導(dǎo)率也不高（圖１）．２．１．２農(nóng)桿菌菌液ＯＤ６００值對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響當(dāng)用于侵染的農(nóng)桿菌菌液ＯＤ６００值為０．６時(shí)，兩個(gè)品種的大豆叢生芽誘導(dǎo)率均達(dá)到最大，，大于６０％；當(dāng)ＯＤ６００值為０．９時(shí)，叢生芽誘導(dǎo)率也均能達(dá)到５０％以上；當(dāng)ＯＤ６００值為０．３時(shí)，叢生芽誘導(dǎo)率不到３０％，說(shuō)明濃度較低的農(nóng)桿菌菌液不利于叢生芽的形成（圖２）．圖１種子萌發(fā)時(shí)間對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響Ｆｉｇ．１Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ圖２根癌農(nóng)桿菌菌液濃度對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響Ｆｉｇ．２Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ２．１．３侵染時(shí)間對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響農(nóng)桿菌菌液濃度相同的條件下，侵染外植體時(shí)間會(huì)影響叢生芽的誘導(dǎo)頻率．本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了３個(gè)不同的侵染時(shí)間：１５、３０、４５ｍｉｎ．結(jié)果表明，農(nóng)桿菌侵染３０ｍｉｎ為兩個(gè)品種的最佳侵染時(shí)間（圖３）．Ｗ８２大豆品種在侵染４５ｍｉｎ時(shí)叢生芽誘導(dǎo)率也較高，說(shuō)明侵染時(shí)間對(duì)Ｗ８２品種的叢生芽誘導(dǎo)率影響較�。玻保垂才囵B(yǎng)時(shí)間對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響農(nóng)桿菌與外植體共培養(yǎng)時(shí)間的不同也會(huì)影響叢生芽的誘導(dǎo)率．與共培養(yǎng)１ｄ和５ｄ相比，共培養(yǎng)３ｄ兩個(gè)品種的大豆叢生芽誘導(dǎo)率最高（圖４）．共培

的影響當(dāng)用于侵染的農(nóng)桿菌菌液ＯＤ６００值為０．６時(shí)，兩個(gè)品種的大豆叢生芽誘導(dǎo)率均達(dá)到最大，大于６０％；當(dāng)ＯＤ６００值為０．９時(shí)，叢生芽誘導(dǎo)率也均能達(dá)到５０％以上；當(dāng)ＯＤ６００值為０．３時(shí)，叢生芽誘導(dǎo)率不到３０％，說(shuō)明濃度較低的農(nóng)桿菌菌液不利于叢生芽的形成（圖２）．圖１種子萌發(fā)時(shí)間對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響Ｆｉｇ．１Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ圖２根癌農(nóng)桿菌菌液濃度對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響Ｆｉｇ．２Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ２．１．３侵染時(shí)間對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響農(nóng)桿菌菌液濃度相同的條件下，侵染外植體時(shí)間會(huì)影響叢生芽的誘導(dǎo)頻率．本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了３個(gè)不同的侵染時(shí)間：１５、３０、４５ｍｉｎ．結(jié)果表明，農(nóng)桿菌侵染３０ｍｉｎ為兩個(gè)品種的最佳侵染時(shí)間（圖３）．Ｗ８２大豆品種在侵染４５ｍｉｎ時(shí)叢生芽誘導(dǎo)率也較高，說(shuō)明侵染時(shí)間對(duì)Ｗ８２品種的叢生芽誘導(dǎo)率影響較�。玻保垂才囵B(yǎng)時(shí)間對(duì)大豆叢生芽誘導(dǎo)率的影響農(nóng)桿菌與外植體共培養(yǎng)時(shí)間的不同也會(huì)影響叢生芽的誘導(dǎo)率．與共培養(yǎng)１ｄ和５ｄ相比，共培養(yǎng)３ｄ兩個(gè)品種的大豆叢生芽誘導(dǎo)率最高（圖４）．共培養(yǎng)時(shí)間過(guò)短會(huì)降低Ｔ－ＤＮＡ向外植體的轉(zhuǎn)移效率，而共培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)造成農(nóng)桿菌過(guò)量生長(zhǎng)，外植體壞死，因此，選擇共培養(yǎng)３ｄ作為兩個(gè)大豆品４８第３０卷第１

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2565297