發(fā)布時(shí)間：2019-11-19 21:39

【摘要】：通過外源添加茉莉酸甲酯(MeJA),研究其調(diào)控液體培養(yǎng)條件下人參發(fā)狀根中皂苷生物合成途徑相關(guān)酶基因在誘導(dǎo)子作用時(shí)表達(dá)情況。以四年生吉林人參主根誘導(dǎo)的人參發(fā)狀根無性系為材料,利用香草醛-硫酸比色法測定MeJA處理前后人參發(fā)狀根的總皂苷含量;同時(shí),利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR測定MeJA處理前后人參發(fā)狀根中鯊烯合成酶(squalene synthase,SQS)、鯊烯環(huán)氧酶(squalene epoxidase,SQE)、氧化鯊烯環(huán)化酶(oxidized squalene cyclase,OSC)、達(dá)瑪烷二醇合成酶(dammarenediol synthase,DS)、β-香樹脂合成酶(β-amyrin synthase,β-AS)和環(huán)阿屯醇合成酶(cycloartenol synthase,CAS)基因的相對表達(dá)量。結(jié)果表明:獲得MeJA添加到人參發(fā)狀根中最佳添加濃度為6×10~(-4)μmol·L~(-1)、添加時(shí)間為22 d、作用時(shí)間為5 d;MeJA的添加可以提高人參發(fā)狀根中過氧化物酶(PPD)、過氧化氫酶(CAT)和過氧化物酶(PPD)的酶活性;經(jīng)過MeJA處理后人參發(fā)狀根中人參皂苷生物合成途徑的SQS,SQE,OSC,DS,β-AS基因的表達(dá)變化均有顯著提高,然而CAS基因的表達(dá)變化不顯著。因此說明在添加MeJA處理后,皂苷生物合成途徑中SQS,SQE,OSC,DS,β-AS基因表達(dá)情況與PPD,CAT,PPO的酶活性的變化趨勢也相一致。
【圖文】：

降?8天時(shí)，人參發(fā)狀根伸長長度約為剛培養(yǎng)時(shí)長度的4倍，且出現(xiàn)根系的分枝上再次分枝，伴隨愈傷化現(xiàn)象出現(xiàn);當(dāng)培養(yǎng)到第35天，發(fā)狀根的分枝可達(dá)到30根以上，見圖1。綜合比對結(jié)果，人參發(fā)狀根系無性系Ｒ9在35d培養(yǎng)周期中，其生長速度較快，能夠產(chǎn)生較多分枝，主根與分枝均呈現(xiàn)較高透明程度，并且顏色為乳白色，愈傷化程度較低，，與其他22個(gè)人參發(fā)狀根無性系相比優(yōu)勢顯著，因此，確定Ｒ9人參發(fā)狀根無性系為最優(yōu)材料，并將其轉(zhuǎn)移到1/2MS液體培養(yǎng)基中在22℃，150r·min－1，暗培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。圖1吉林人參發(fā)狀根無性系的篩選Fig.1ScreeningofJilinginsenghairyroot3.2MeJA對人參發(fā)狀根生長量與皂苷含量的影響在篩選最佳添加濃度、添加時(shí)間和作用時(shí)間時(shí)MeJA對人參發(fā)狀根的生長量、皂苷含量的影響顯著，最佳條件下處理組的生長量和皂苷含量高于對照組。本實(shí)驗(yàn)通過篩選獲得MeJA最佳添加濃度為6×10－4μmol·L－1、最佳添加時(shí)間為22d，最佳作用時(shí)間為5d，見圖2。圖2MeJA最佳添加濃度、添加時(shí)間、作用時(shí)間對人參發(fā)狀根生長量及皂苷含量的影響Fig.2Effectsofdifferentconcentrations，additiontimeandac-tiontimeofMeJAongrowthandsaponincontentinginsenghairyroot·2272·

Ｒ9人參發(fā)狀根無性系為最優(yōu)材料，并將其轉(zhuǎn)移到1/2MS液體培養(yǎng)基中在22℃，150r·min－1，暗培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。圖1吉林人參發(fā)狀根無性系的篩選Fig.1ScreeningofJilinginsenghairyroot3.2MeJA對人參發(fā)狀根生長量與皂苷含量的影響在篩選最佳添加濃度、添加時(shí)間和作用時(shí)間時(shí)MeJA對人參發(fā)狀根的生長量、皂苷含量的影響顯著，最佳條件下處理組的生長量和皂苷含量高于對照組。本實(shí)驗(yàn)通過篩選獲得MeJA最佳添加濃度為6×10－4μmol·L－1、最佳添加時(shí)間為22d，最佳作用時(shí)間為5d，見圖2。圖2MeJA最佳添加濃度、添加時(shí)間、作用時(shí)間對人參發(fā)狀根生長量及皂苷含量的影響Fig.2Effectsofdifferentconcentrations，additiontimeandac-tiontimeofMeJAongrowthandsaponincontentinginsenghairyroot·2272·

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