【摘要】：類黃酮7-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(F7-OMT)具有甲基轉(zhuǎn)移酶功能,能催化底物類黃酮甲基化產(chǎn)生植物抗毒素,提高植物的抗菌性。為了給進(jìn)一步研究該酶蛋白的功能奠定基礎(chǔ),以青稞"94-19-1"為材料,采用同源克隆方法得到青稞F7-OMT基因編碼片段。生物信息學(xué)分析表明,青稞F7-OMT開放閱讀框(ORF)全長為1173bp,編碼390個氨基酸,蛋白分子質(zhì)量為42 207.8Da,等電點(diǎn)pI為5.36,無信號肽序列,具有甲基轉(zhuǎn)移酶2(Methyltransf_2,pfam00891)和二聚化(Dimerization,pfam08100)保守域。通過亞克隆將F7-OMT連接到表達(dá)載體pET-32a上,構(gòu)建pET-32a-F7-OMT融合表達(dá)載體,在E.coli BL21(DE3)pLysS中誘導(dǎo)表達(dá),并采用親和層析純化法得到純化蛋白。
【圖文】：

物種ＯＭＴ家族中酶的相似性不一定更高，物種親緣關(guān)系更近的功能相似的ＯＭＴｓ同源性越強(qiáng)，且７－ＯＭＴｓ并不是非常保守。方框中Ｄ表示Ａｓｐ２５８，為ＳＡＭ結(jié)合位點(diǎn)；方框中Ｈ表示Ｈｉｓ２９６，為接受質(zhì)子的活性位點(diǎn)；＊表示終止密碼子ＤｉｎｔｈｅｂｏｘｉｓＡｓｐ２５８ｆｏｒｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｏｆＳＡＭ；ＨｉｎｔｈｅｂｏｘｉｓＨｉｓ２９６ｆｏｒａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｏｆａｃｃｅｐｔｉｎｇｐｒｏｔｏｎｓ；＊ｉｓｔｅｒｍｉｎａｔｏｒｃｏｄｏｎ圖２青稞Ｆ７－ＯＭＴ基因的ＯＲＦ序列及其預(yù)測氨基酸序列Ｆｉｇ．２ＴｏｔａｌＯＲＦｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｐｕｔａｔｉｖｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＦ７－ＯＭＴｇｅｎｅｉｎｈｕｌｌｅｓｓｂａｒｌｅｙ·２１第·１期牟利等：青稞Ｆ７－ＯＭＴ基因的克隆及原核表達(dá)分析

物種ＯＭＴ家族中酶的相似性不一定更高，物種親緣關(guān)系更近的功能相似的ＯＭＴｓ同源性越強(qiáng)，且７－ＯＭＴｓ并不是非常保守。方框中Ｄ表示Ａｓｐ２５８，，為ＳＡＭ結(jié)合位點(diǎn)；方框中Ｈ表示Ｈｉｓ２９６，為接受質(zhì)子的活性位點(diǎn)；＊表示終止密碼子ＤｉｎｔｈｅｂｏｘｉｓＡｓｐ２５８ｆｏｒｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｏｆＳＡＭ；ＨｉｎｔｈｅｂｏｘｉｓＨｉｓ２９６ｆｏｒａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｏｆａｃｃｅｐｔｉｎｇｐｒｏｔｏｎｓ；＊ｉｓｔｅｒｍｉｎａｔｏｒｃｏｄｏｎ圖２青稞Ｆ７－ＯＭＴ基因的ＯＲＦ序列及其預(yù)測氨基酸序列Ｆｉｇ．２ＴｏｔａｌＯＲＦｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｐｕｔａｔｉｖｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＦ７－ＯＭＴｇｅｎｅｉｎｈｕｌｌｅｓｓｂａｒｌｅｙ·２１第·１期牟利等：青稞Ｆ７－ＯＭＴ基因的克隆及原核表達(dá)分析

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 程瑩鑫;梁吉利;劉慶莉;董利東;李文濱;范素杰;徐鵬飛;張淑珍;;疫霉根腐病菌毒素對大豆不同組織中總多酚含量的影響[J];大豆科學(xué);2014年04期

本文編號：2563621