【摘要】：睪丸酮叢毛單胞菌是以環(huán)境中的甾體激素作為其生存的唯一碳源和能源,并能夠通過體內(nèi)的一系列酶將甾體激素降解為水和二氧化碳,以此特性而成為研究熱點。短鏈脫氫酶(SDRs)是睪丸酮叢毛單胞菌中一類依賴于NAD(P)H的氧化還原酶,17β羥基類固醇脫氫酶是SDR超級家族成員之一,其主要功能是催化類固醇的羥基/酮基的氧化還原。本文成功從睪丸酮叢毛單胞菌ATCC11996中克隆出17β羥基類固醇脫氫酶(17β-HSDX)基因,構建了重組表達載體pET-15b-17β-HSDX,將重組表達載體轉化入大腸桿菌BL21中,成功表達并通過Ni柱親和層析的方法純化了17β-HSDX蛋白,分子量約為27.2KDa,純化后濃度為2.64mg/mL。17β-HSDX基因包含750bp堿基,編碼249個氨基酸組成。利用純化后的蛋白免疫兔子,制備了效價為1:16000的17β-HSDX多克隆抗體,并建立了測定17β-HSDX的標準曲線。分別用睪丸酮、雌酮、雌二醇、雌三醇來誘導睪丸酮叢毛單胞菌,用Elsia方法分別測定了17β-HSDX蛋白的表達量,發(fā)現(xiàn)在睪丸酮和雌酮進行誘導時17β-HSDX蛋白的表達量較高。利用同源重組的方法敲除17β-HSDX基因,成功獲得17β-HSDX缺失的突變菌株。利用高效液相色譜法對突變型與野生型菌株的培養(yǎng)基中四種誘導激素的殘留量進行檢測,在睪丸酮和雌酮的誘導下,野生型和突變型的培養(yǎng)基中兩種激素的殘留量差值最為明顯。因此17β-HSDX對降解睪丸酮和雌酮起到了重要作用。
【圖文】：

7β-HSDXPCR電泳結果圖

圖 2.2 質粒提取電泳鑒定：DL 15000 Marker ；2，3，5，6，，7：目的片斷與 pUCM-T4：陰性對照；8：DL 2000 Marker定結果.2.1 中提取的質粒作為模板，聚合酶鏈式反應電泳結
【學位授予單位】：長春理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q93;Q78

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1 白澤方;潘大仁;霍煜t

本文編號：2562600