發(fā)布時(shí)間：2019-11-09 03:34

【摘要】：家蠅是重要的疾病媒介,其抗藥性問(wèn)題突出,其中細(xì)胞色素P450介導(dǎo)的代謝解毒作用增強(qiáng)是其抗藥性的重要機(jī)制。本研究通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)并獲得有活性的CYP6G4及細(xì)胞色素P450還原酶(CPR),使用體外重組酶系檢測(cè)家蠅CYP6G4對(duì)7種擬除蟲(chóng)菊酯和3種香豆素類(lèi)植物次生物質(zhì)的代謝活性,明確CYP6G4在代謝外源物質(zhì)中的作用。目前主要取得如下成果：(1) CYP6G4蛋白和CPR蛋白在大腸中成功地得到表達(dá),重組表達(dá)的CYP6G4和CPR分子質(zhì)量分別為59×103和76×103Da,其中CYP6G4檢測(cè)到明顯的P450特征峰,表達(dá)量為0.37±0.02 nmol/mg蛋白；CPR表現(xiàn)出細(xì)胞色素C還原酶活性,表達(dá)量為0.47±0.05nmol/mg蛋白,兩者的表達(dá)蛋白主要錨定在細(xì)胞膜上。(2)HPLC檢測(cè)到CYP6G4對(duì)胺菊酯、香豆素、歐前胡素的代謝活性,其中胺菊酯代謝產(chǎn)物為羥基化胺菊酯。LC-MS檢測(cè)了加入b5對(duì)體外重組酶系的作用,結(jié)果顯示加入b5的實(shí)驗(yàn)組和不加b5的實(shí)驗(yàn)組的產(chǎn)物形成均符合米氏動(dòng)力學(xué)特征,km分別為94.25±8.65μM和36.37±3.62μM,Vmax分別為686.8 peak area/min/pmol P450和536.5peak area/min/pmol P450,并且加入b5可以促進(jìn)CYP6G4對(duì)胺菊酯的代謝。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q78

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本文編號(hào)：2558219