【摘要】：掌葉半夏凝集素(Pinellia Pedatisecta Agglutinin,PPA)屬于單子葉甘露糖結(jié)合凝集素。為研究掌葉半夏凝集素基因的功能,本論文以CAMV 35S啟動(dòng)子和擬南芥韌皮部特異性表達(dá)啟動(dòng)子AtPP2驅(qū)動(dòng)下的5個(gè)掌葉半夏凝集素基因的轉(zhuǎn)基因煙草為材料進(jìn)行以下研究：以實(shí)驗(yàn)室前期獲得的CAMV 35S驅(qū)動(dòng)下的5個(gè)凝集素轉(zhuǎn)基因煙草和AtPP2啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下的5個(gè)凝集素轉(zhuǎn)基因煙草T0代植株為材料,分別進(jìn)行Basta抗性篩選以及分子鑒定,共獲得各單位點(diǎn)插入轉(zhuǎn)基因株系如下：35S-PPA-2：3個(gè),35S-PPA-3:3個(gè),35S-PPA-4:7個(gè),35S.PPA-5:9個(gè),35S-PPA-6:5個(gè),AtPP2-PPA-3:4個(gè),AtPP2-PPA-4:3個(gè),AtPP2-PPA-5:3個(gè),AtPP2-PPA-6:3個(gè)；對獲得的單位點(diǎn)插入轉(zhuǎn)基因煙草T1代植株自交繁育后代種子,在35S-PPA-5和AtPP2-PPA-5轉(zhuǎn)基因煙草T3代中繼續(xù)進(jìn)行Basta抗性鑒定,共獲得10株35S-PPA-5轉(zhuǎn)基因純合煙草,6株AtPP2-PPA-5轉(zhuǎn)基因純合煙草；以35S-PPA-5和AtPP2-PPA-5轉(zhuǎn)基因煙草T3代純合植株為材料,通過western-blot分析,將獲得的純合轉(zhuǎn)基因株系按蛋白表達(dá)水平分成高、中、低三類進(jìn)行抗蚜試驗(yàn),結(jié)果表明這些轉(zhuǎn)基因煙草均具有顯著的抗蚜效果,35S-PPA-5轉(zhuǎn)基因植株平均抑蚜率為84.8%,高蛋白表達(dá)量的轉(zhuǎn)基因植株抑蚜率高達(dá)99.37%；而AtPP2-PPA-5轉(zhuǎn)基因植株平均抑蚜率為53.78%,高蛋白表達(dá)量的轉(zhuǎn)基因植株抑蚜率為59.95%,三種蛋白表達(dá)類型的AtPP2-PPA-5轉(zhuǎn)基因植株普遍低于35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下的轉(zhuǎn)基因植株；PPA-5可以作為高效抗蚜候選基因,具有很高的抗蚜效果；某些單子葉甘露糖結(jié)合凝集素不僅具有抗蟲作用,還具有抗病原菌和線蟲的作用,為研究PPA-5是否也具有抗病作用,以蛋白表達(dá)量高的35S-PPA-5轉(zhuǎn)基因煙草T3代純合植株為材料,接種棉花黃萎病致病菌,發(fā)現(xiàn)病斑較對照明顯減少,說明PPA蛋白可能具有抗黃萎病活性；目前關(guān)于掌葉半夏凝集素基因原核表達(dá)的研究極少,為在蛋白水平研究PPA-5的功能,通過對PPA-5的生物學(xué)信息分析切除了該蛋白序列前22個(gè)氨基酸的信號肽序列,然后將切割的PPA-5基因(△PPA-5)經(jīng)限制性內(nèi)切酶EcoR I和Xho I雙酶切,構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒載體pGEX-6p-1-ΔPPA-5,轉(zhuǎn)入表達(dá)菌株Rosetta(DE3)中成功表達(dá),并將純化得到的PPA-5蛋白采用對峙法進(jìn)行黃萎病菌抑菌試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步確定了PPA的抑菌活性；
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 許蘭珍;彭愛紅;何永睿;姚利曉;雷天剛;劉小豐;姜國金;鄒修平;陳善春;;異源韌皮部特異啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)基因枳中的表達(dá)[J];園藝學(xué)報(bào);2014年01期

2 鮑錦庫;;植物凝集素的功能[J];生命科學(xué);2011年06期

3 吳志明;董文琦;黨志紅;潘文亮;謝曉亮;溫春秀;陳勁楓;;半夏凝集素基因克隆及其對桃蚜的抗性研究[J];南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

4 張曉英;甘敬;尹偉倫;朱禎;王華芳;;國槐轉(zhuǎn)雪花蓮凝集素基因及抗蚜性[J];林業(yè)科學(xué);2010年02期

5 王少敏;葉孟;倪曙民;;槲寄生凝集素對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J];中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2007年09期

6 袁英;李啟云;孔祥梅;劉德璞;;轉(zhuǎn)雙價(jià)抗蟲基因Bt-pta玉米植株的獲得[J];中國農(nóng)學(xué)通報(bào);2006年10期

7 徐瓊芳,田芳,陳孝,李連城,林志姍,莫英,徐惠君,劉燕,許為鋼,杜麗璞,辛志勇;轉(zhuǎn)GNA基因小麥新株系的分子檢測和抗蚜蟲性鑒定[J];麥類作物學(xué)報(bào);2005年03期

8 肖松華,劉劍光,吳巧娟,狄佳春,許乃銀,陳旭升,柏立新;轉(zhuǎn)外源凝集素基因棉花對棉蚜的抗性鑒定[J];棉花學(xué)報(bào);2005年02期

9 令利軍,萬平,張正英;幾種常見植物抗蟲基因作用機(jī)理研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2004年01期

10 ;Cloning and molecular characterization of a novel lectin gene from Pinellia ternata[J];Cell Research;2003年04期

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1 令利軍;狹葉半夏凝集素結(jié)構(gòu)域表達(dá)與功能研究[D];蘭州大學(xué);2009年

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1 陳勁;掌葉半夏凝集素基因的克隆及其功能驗(yàn)證[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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本文編號：2557502