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桑蠶繭、蛹中黃酮類化合物及其相關(guān)基因表達(dá)分析

發(fā)布時間:2019-11-07 18:54
【摘要】:我國彩色繭絲蠶品種資源豐富,彩色繭絲具有保濕、抑菌、抗氧化、防紫外線等特性;而蠶蛹不僅富含蛋白質(zhì)且含有多種活性物質(zhì)及大量人體所需的微量元素。因此,繭殼和蠶蛹的開發(fā)日趨倍受關(guān)注。彩色繭中含有豐富的色素,主要來自桑葉,經(jīng)蠶采食后,由中腸上皮細(xì)胞吸收后進(jìn)入血淋巴,最后進(jìn)入絲腺并在絲膠層積累,進(jìn)而使繭絲著色。相關(guān)研究表明,家蠶綠繭系形成主要色素為黃酮類色素。本研究以不同繭色蠶品種為材料,檢測蠶繭和蠶蛹中黃酮類化合物的含量,并通過高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,簡稱HPLC)分析蠶蛹中蘆丁、槲皮素、異槲皮苷、紫云英苷和綠原酸的含量,這為更好地開發(fā)利用天然彩色繭和蠶蛹資源提供重要的參考。采用熒光定量PCR技術(shù)分析了不同品種五齡期家蠶中腸、脂肪體和絲腺中綠繭相關(guān)基因UGT86和UGT65以及黃繭相關(guān)基因CBP和Cameo1的表達(dá)情況,為探討家蠶組織之間的色素差異及綠繭的形成機(jī)理,提供新的參考。主要的結(jié)果如下:1.白繭、黃繭和綠繭繭殼中的黃酮類化合物的含量分析綠繭繭殼中的黃酮類化合物的含量顯著高于黃繭和白繭,并且綠繭系的繭色深淺與黃酮類化合物的含量高低直接相關(guān)。黃色繭殼中黃酮類化合物含量與白色繭殼之間不存在明顯差異,甚至有少數(shù)黃色繭品種的繭殼中黃酮類化合物的含量低于白色繭品種的現(xiàn)象,說明并非所有彩色繭的繭殼中黃酮類化合物的含量都比白色繭高。2.白繭、黃繭和綠繭品種蛹中的黃酮類化合物的含量分析白色、黃色以及綠色3種繭色蠶蛹中的黃酮類化合物的含量介于2.00 mg/g~5.00 mg/g之間。綠繭蛹中黃酮類化合物的含量相對其他繭色的蛹雖然偏高,卻未達(dá)到顯著水平,但部分品種間蛹中黃酮類化合物的含量存在明顯差異。同一家蠶品種蛹中黃酮類化合物的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于繭殼中的含量(1~10倍不等)。3.提供了一種利用HPLC檢測家蠶蛹中黃酮類化合物的含量的方法檢測蠶蛹中四種黃酮類化合物的色譜條件為:流動相由乙睛和甲酸組(A:0.05%H3PO4水溶液,B:乙腈),采用梯度洗脫,洗脫程序?yàn)?0~9min,B 20%~80%;9~12min,B 80%;12~12.1min,B 80%~20%;12.1~16min,B 20%;體積流量:0.8mL/min;進(jìn)樣量:20uL;檢測波長:254nm;柱溫:室溫。本試驗(yàn)操作簡單、快捷、靈敏度高,為蠶蛹在食用方面的開發(fā)提供了實(shí)用可靠的檢測方法。4.不同繭色蛹中黃酮類化合物的分離及其鑒定通過HPLC檢測家蠶蛹中蘆丁、槲皮素、異槲皮苷、紫云英苷4種黃酮類化合物以及綠原酸的含量:本研究所檢測的蠶蛹樣品中均不含有綠原酸;不同繭色的蛹中總黃酮類化合物的含量不同,相同繭色不同品種蛹中黃酮類化合物的種類和含量也存在明顯差異,綠色繭的蠶蛹中槲皮素、異槲皮苷含量較其他繭色的蛹較高,這兩種黃酮類化合物可作為綠色繭的標(biāo)記物;黃色繭的蛹不含或含有較低的蘆丁。5.綠繭相關(guān)基因UGT86和UGT65及黃繭相關(guān)基因CBP和Cameo1的相對表達(dá)含量檢測了不同繭色品種五齡幼蟲中腸、絲腺和脂肪體中4個繭色相關(guān)基因的相對表達(dá)量,黃色繭品種CBP的表達(dá)相對較高,綠色繭品種UGT86的表達(dá)相對較高。而Cameo1和UGT65的表達(dá)水平與繭色形成并沒有表現(xiàn)出明顯的直接關(guān)系。幼蟲階段(5L3d)、蛹中期和蛹后期三個時期的脂肪體中都有CBP的表達(dá),并且黃色繭顯著高于綠色繭,尤其是進(jìn)入蛹期后。UGT86基因在黃色繭的蛹不同時期脂肪體的表達(dá)呈現(xiàn)先上升后趨于穩(wěn)定的現(xiàn)象,而綠色繭中則表現(xiàn)為先下降后趨于穩(wěn)定的趨勢。
【學(xué)位授予單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:S881.2

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7 李O

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