【摘要】：【目的】發(fā)現(xiàn)昆蟲精巢干細(xì)胞自我更新相關(guān)基因3'UTR上的保守miRNA靶位點(diǎn),為深入研究昆蟲精子發(fā)生進(jìn)程中的miRNA-基因調(diào)控關(guān)系提供參考。【方法】使用Blast搜索27種全變態(tài)昆蟲精巢干細(xì)胞自我更新相關(guān)基因,并預(yù)測這些基因的3'UTR。使用Target Scan預(yù)測這些基因3'UTR上的miRNA靶位點(diǎn)。對家蠶Bombyx mori和小菜蛾P(guān)lutella xylostella的Chinmo和Imp基因包含let-7-5p靶標(biāo)點(diǎn)的3'UTR序列進(jìn)行了克隆,使用雙熒光素酶報告系統(tǒng)對其靶標(biāo)關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證�！窘Y(jié)果】在27種全變態(tài)昆蟲中發(fā)現(xiàn)了17個精巢干細(xì)胞自我更新相關(guān)基因。利用Target Scan在這些基因的3'UTR上預(yù)測到了203個保守的miRNA靶位點(diǎn)。其中Zfh-1,Chinmo,Ken及Imp的3'UTR上存在大量的miRNA靶位點(diǎn),但miRNA靶位點(diǎn)數(shù)目在不同昆蟲類群中也存在很大差異。其中,Chinmo及Imp 3'UTR上的let-7-5p靶位點(diǎn)在昆蟲中保守。分別克隆了家蠶和小菜蛾Chinmo和Imp的3'UTR,通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)轉(zhuǎn)染239T細(xì)胞證實(shí)了let-7-5p對Chinmo和Imp兩個基因的調(diào)控作用�！窘Y(jié)論】發(fā)現(xiàn)在4個昆蟲精巢干細(xì)胞自我更新相關(guān)基因Zfh-1,Chinmo,Ken和Imp的3'UTR上存在大量的miRNA靶標(biāo)位點(diǎn)。其中Chinmo及Imp基因3'UTR上let-7-5p靶位點(diǎn)在大多數(shù)全變態(tài)昆蟲中保守,雙熒光素酶報告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了家蠶和小菜蛾中l(wèi)et-7-5p與Chinmo和Imp存在相互作用,為進(jìn)一步研究miRNA在昆蟲精子發(fā)生進(jìn)程中的功能提供了參考。
【圖文】：

8期馬行洲等:miＲNA調(diào)控昆蟲精巢干細(xì)胞自我更新相關(guān)基因的保守性分析和靶標(biāo)驗(yàn)證853圖1利用Miranda，Pita和ＲNAhybrid預(yù)測Chinmo與let-7-5p，，Imp與let-7-5p及Zfh-1與miＲ-12-5p的互作關(guān)系Fig.1PredictionofinteractionbetweenChinmoandlet-7-5p，Impandlet-7-5p，andZfh-1andmiＲ-12-5pbyMiranda，PitaandＲNAhybrid圖2Chinmo3'UTＲ上的保守let-7靶位點(diǎn)Fig.2Theconservedlet-7targetsitesonthe3'UTＲofChinmo

8期馬行洲等:miＲNA調(diào)控昆蟲精巢干細(xì)胞自我更新相關(guān)基因的保守性分析和靶標(biāo)驗(yàn)證853圖1利用Miranda，Pita和ＲNAhybrid預(yù)測Chinmo與let-7-5p，Imp與let-7-5p及Zfh-1與miＲ-12-5p的互作關(guān)系Fig.1PredictionofinteractionbetweenChinmoandlet-7-5p，Impandlet-7-5p，andZfh-1andmiＲ-12-5pbyMiranda，PitaandＲNAhybrid圖2Chinmo3'UTＲ上的保守let-7靶位點(diǎn)Fig.2Theconservedlet-7targetsitesonthe3'UTＲofChinmo


本文編號：2557114