【摘要】：【目的】獲得玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)環(huán)腺苷酸磷酸二酯酶(c AMP phosphodiesterase,PDE)基因,并分析其在病菌侵染結(jié)構(gòu)發(fā)育過程及侵染寄主早期階段中的表達,為深入探索c AMP信號途徑調(diào)控病菌致病性的作用機制打下基礎(chǔ)�！痉椒ā扛鶕�(jù)釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、白色念珠菌(Candida albicans)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、綠僵菌(Metarhizium anisopliae)和黑曲霉(Aspergillus niger)6種真菌PDE基因的保守序列,利用簡并引物PCR對基因保守片段進行擴增,結(jié)合RACE和Genome Walking技術(shù)獲得基因全長及其側(cè)翼序列;利用MEGA 5.0軟件對PDE蛋白預測編碼產(chǎn)物進行多重序列比對,并采用鄰近法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹;利用GSDS分析基因結(jié)構(gòu),Prot Param分析理化性質(zhì),SOMPA預測二級結(jié)構(gòu),SMART數(shù)據(jù)庫在線分析保守結(jié)構(gòu)域;收集人造疏水介質(zhì)誘導下侵染結(jié)構(gòu)發(fā)育不同時期以及侵染感病寄主葉片不同時間的玉米大斑病菌材料,利用q RT-PCR技術(shù)研究StPDE在病菌侵染結(jié)構(gòu)形成過程中不同階段的轉(zhuǎn)錄水平�！窘Y(jié)果】玉米大斑病菌基因組中存在1個高親和力磷酸二酯酶基因(StH-PDE)和1個低親和力磷酸二酯酶基因(StL-PDE)。其中,StH-PDE全長3 208 bp,包含5個內(nèi)含子和6個外顯子,ORF為2 898 bp。StL-PDE全長5054 bp,包含4個內(nèi)含子和5個外顯子,ORF為3 090 bp。StH-PDE和StL-PDE分別含有保守的Ⅰ型和Ⅱ型c AMP磷酸二酯酶催化結(jié)構(gòu)域。不同的植物病原真菌中PDE同源基因分別呈現(xiàn)出高度的相似性,其中,StH-PDE與Magnaporthe grisea、Cordyceps militaris、Metarhizium acridum等病原真菌的高親和力磷酸二酯酶基因聚于同一進化支,StL-PDE與Ascochyta rabiri、Scedosporium apiospermum、Fusarium oxysporum、Metarhizium album等病原真菌的低親和力磷酸二酯酶基因聚于相同進化支。人造疏水介質(zhì)誘導下,與菌絲相比,StH-PDE和StL-PDE在分生孢子中的表達水平均顯著上調(diào),其中StH-PDE和StL-PDE分別上調(diào)了約2倍和52倍。孢子萌發(fā)初期兩個基因表達水平顯著下調(diào),隨著萌發(fā)的進行,表達水平緩慢回升,至附著胞形成階段,基因表達出現(xiàn)了第2次高峰,隨后表達水平再次下調(diào)。在整個過程中,StH-PDE的最高表達水平則出現(xiàn)在附著胞形成時期,達到了菌絲體中的近7倍、分生孢子中的近2倍,而StL-PDE的表達水平始終低于其在分生孢子中的表達水平。StH-PDE和StL-PDE在病菌侵染寄主過程中的表達水平變化趨勢與其在人工疏水介質(zhì)誘導下的表現(xiàn)基本一致。在孢子萌發(fā)早期表達顯著下調(diào),隨著時間延長,緩慢回升,至接種后18和24 h StH-PDE表達水平上調(diào),超過萌發(fā)初期�！窘Y(jié)論】在病菌侵染結(jié)構(gòu)發(fā)育過程中,StH-PDE和StL-PDE均呈現(xiàn)下調(diào)-上調(diào)-下調(diào)的表達水平變化趨勢。StH-PDE在附著胞時期表達水平最高,StL-PDE在分生孢子中的相對表達水平最高。
【圖文】：

StL-PDE克隆

16期申s諾齲河衩狀蟀卟【廢佘賬崍姿岫ッ富蚩寺〖氨澩鋟治，

本文編號：2556224