剛毛檉柳ThPP2C基因的克隆和表達(dá)分析
發(fā)布時(shí)間：2019-10-08 03:46
【摘要】：蛋白磷酸酶2C(PP2C)是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶,在體內(nèi)以單體形式存在,由它催化的可逆磷酸化反應(yīng)是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要組成部分,這一過(guò)程幾乎參與所有的生理和病理過(guò)程。本研究從檉柳中克隆獲得一條PP2C基因,命名為T(mén)hPP2C。該基因開(kāi)放讀碼框(ORF)長(zhǎng)849 bp,編碼282氨基酸,推測(cè)蛋白質(zhì)分子量為30.54 kDa,理論等電點(diǎn)為7.13。qRT-PCR結(jié)果顯示,0.4 mol·L~(-1)NaCl、20%(w/v)PEG6000、150μmol·L~(-1)ABA和100μmol·L~(-1)JA脅迫處理后,ThPP2C基因在剛毛檉柳根和葉中的表達(dá)均發(fā)生了明顯改變,但時(shí)空表達(dá)模式不完全相同。NaCl、ABA和JA處理后ThPP2C基因在葉中都表現(xiàn)為下調(diào)表達(dá)。而根中,NaCl和JA脅迫后主要表現(xiàn)為上調(diào)表達(dá)。ABA處理早期表達(dá)下調(diào),隨后表達(dá)量逐漸增加。與其他3種脅迫不同的是,PEG6000處理后ThPP2C基因在根中明顯下調(diào),而在葉中脅迫早期表現(xiàn)不明顯,48 h后被高度誘導(dǎo)。表明ThPP2C基因可能參與了剛毛檉柳高鹽、干旱以及激素處理的適應(yīng)過(guò)程,但其功能還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。
【圖文】：
圖1檉柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝膠電泳;B．檉柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ擴(kuò)增;C．檉柳內(nèi)參和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ擴(kuò)增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene圖2ThPP2C基因與其它物種PP2C基因的多序列比對(duì)注M1/M2．二價(jià)金屬離子結(jié)合位點(diǎn);1～3．保守功能區(qū)Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同處理后ThPP2C基因的表達(dá)分析為了初步分析ThPP2C基因的逆境脅迫應(yīng)答功能，利用qＲT-PCＲ技術(shù)分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA脅迫處理后剛毛檉柳根和葉中ThPP2C基因相對(duì)表達(dá)情況(圖4)。結(jié)果顯示:在NaCl處理后，根中ThPP2C基因表達(dá)在脅迫早期(6h)明顯受抑制(僅為對(duì)照的3．8%)，隨后被上調(diào)表達(dá)，脅迫48h時(shí)表達(dá)量最高，為對(duì)照的3．80倍。葉中所有時(shí)間點(diǎn)都表現(xiàn)為下調(diào)表達(dá)，其中24h時(shí)表達(dá)量最低，僅為對(duì)照的2．3%。與NaCl脅迫不同，PEG處理后根中ThPP2C基因的表達(dá)均398植物研究37卷
圖1檉柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝膠電泳;B．檉柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ擴(kuò)增;C．檉柳內(nèi)參和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ擴(kuò)增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene圖2ThPP2C基因與其它物種PP2C基因的多序列比對(duì)注M1/M2．二價(jià)金屬離子結(jié)合位點(diǎn);1～3．保守功能區(qū)Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同處理后ThPP2C基因的表達(dá)分析為了初步分析ThPP2C基因的逆境脅迫應(yīng)答功能，利用qＲT-PCＲ技術(shù)分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA脅迫處理后剛毛檉柳根和葉中ThPP2C基因相對(duì)表達(dá)情況(圖4)。結(jié)果顯示:在NaCl處理后，，根中ThPP2C基因表達(dá)在脅迫早期(6h)明顯受抑制(僅為對(duì)照的3．8%)，隨后被上調(diào)表達(dá)，脅迫48h時(shí)表達(dá)量最高，為對(duì)照的3．80倍。葉中所有時(shí)間點(diǎn)都表現(xiàn)為下調(diào)表達(dá)，其中24h時(shí)表達(dá)量最低，僅為對(duì)照的2．3%。與NaCl脅迫不同，PEG處理后根中ThPP2C基因的表達(dá)均398植物研究37卷
【作者單位】： 東北林業(yè)大學(xué)林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(12523017)~~
【分類號(hào)】：Q943.2;S793.5
本文編號(hào)：2546075
【圖文】：
圖1檉柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝膠電泳;B．檉柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ擴(kuò)增;C．檉柳內(nèi)參和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ擴(kuò)增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene圖2ThPP2C基因與其它物種PP2C基因的多序列比對(duì)注M1/M2．二價(jià)金屬離子結(jié)合位點(diǎn);1～3．保守功能區(qū)Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同處理后ThPP2C基因的表達(dá)分析為了初步分析ThPP2C基因的逆境脅迫應(yīng)答功能，利用qＲT-PCＲ技術(shù)分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA脅迫處理后剛毛檉柳根和葉中ThPP2C基因相對(duì)表達(dá)情況(圖4)。結(jié)果顯示:在NaCl處理后，根中ThPP2C基因表達(dá)在脅迫早期(6h)明顯受抑制(僅為對(duì)照的3．8%)，隨后被上調(diào)表達(dá)，脅迫48h時(shí)表達(dá)量最高，為對(duì)照的3．80倍。葉中所有時(shí)間點(diǎn)都表現(xiàn)為下調(diào)表達(dá)，其中24h時(shí)表達(dá)量最低，僅為對(duì)照的2．3%。與NaCl脅迫不同，PEG處理后根中ThPP2C基因的表達(dá)均398植物研究37卷
圖1檉柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝膠電泳;B．檉柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ擴(kuò)增;C．檉柳內(nèi)參和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ擴(kuò)增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene圖2ThPP2C基因與其它物種PP2C基因的多序列比對(duì)注M1/M2．二價(jià)金屬離子結(jié)合位點(diǎn);1～3．保守功能區(qū)Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同處理后ThPP2C基因的表達(dá)分析為了初步分析ThPP2C基因的逆境脅迫應(yīng)答功能，利用qＲT-PCＲ技術(shù)分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA脅迫處理后剛毛檉柳根和葉中ThPP2C基因相對(duì)表達(dá)情況(圖4)。結(jié)果顯示:在NaCl處理后，，根中ThPP2C基因表達(dá)在脅迫早期(6h)明顯受抑制(僅為對(duì)照的3．8%)，隨后被上調(diào)表達(dá)，脅迫48h時(shí)表達(dá)量最高，為對(duì)照的3．80倍。葉中所有時(shí)間點(diǎn)都表現(xiàn)為下調(diào)表達(dá)，其中24h時(shí)表達(dá)量最低，僅為對(duì)照的2．3%。與NaCl脅迫不同，PEG處理后根中ThPP2C基因的表達(dá)均398植物研究37卷
【作者單位】： 東北林業(yè)大學(xué)林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(12523017)~~
【分類號(hào)】：Q943.2;S793.5
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本文編號(hào)：2546075
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