【摘要】：蛋白磷酸酶2C(PP2C)是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶,在體內(nèi)以單體形式存在,由它催化的可逆磷酸化反應是細胞信號轉(zhuǎn)導的重要組成部分,這一過程幾乎參與所有的生理和病理過程。本研究從檉柳中克隆獲得一條PP2C基因,命名為ThPP2C。該基因開放讀碼框(ORF)長849 bp,編碼282氨基酸,推測蛋白質(zhì)分子量為30.54 kDa,理論等電點為7.13。qRT-PCR結(jié)果顯示,0.4 mol·L~(-1)NaCl、20%(w/v)PEG6000、150μmol·L~(-1)ABA和100μmol·L~(-1)JA脅迫處理后,ThPP2C基因在剛毛檉柳根和葉中的表達均發(fā)生了明顯改變,但時空表達模式不完全相同。NaCl、ABA和JA處理后ThPP2C基因在葉中都表現(xiàn)為下調(diào)表達。而根中,NaCl和JA脅迫后主要表現(xiàn)為上調(diào)表達。ABA處理早期表達下調(diào),隨后表達量逐漸增加。與其他3種脅迫不同的是,PEG6000處理后ThPP2C基因在根中明顯下調(diào),而在葉中脅迫早期表現(xiàn)不明顯,48 h后被高度誘導。表明ThPP2C基因可能參與了剛毛檉柳高鹽、干旱以及激素處理的適應過程,但其功能還有待進一步驗證。
【圖文】：

圖1檉柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝膠電泳;B．檉柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ擴增;C．檉柳內(nèi)參和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ擴增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene圖2ThPP2C基因與其它物種PP2C基因的多序列比對注M1/M2．二價金屬離子結(jié)合位點;1～3．保守功能區(qū)Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同處理后ThPP2C基因的表達分析為了初步分析ThPP2C基因的逆境脅迫應答功能，利用qＲT-PCＲ技術(shù)分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA脅迫處理后剛毛檉柳根和葉中ThPP2C基因相對表達情況(圖4)。結(jié)果顯示:在NaCl處理后，根中ThPP2C基因表達在脅迫早期(6h)明顯受抑制(僅為對照的3．8%)，隨后被上調(diào)表達，脅迫48h時表達量最高，為對照的3．80倍。葉中所有時間點都表現(xiàn)為下調(diào)表達，其中24h時表達量最低，僅為對照的2．3%。與NaCl脅迫不同，PEG處理后根中ThPP2C基因的表達均398植物研究37卷

圖1檉柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝膠電泳;B．檉柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ擴增;C．檉柳內(nèi)參和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ擴增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene圖2ThPP2C基因與其它物種PP2C基因的多序列比對注M1/M2．二價金屬離子結(jié)合位點;1～3．保守功能區(qū)Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同處理后ThPP2C基因的表達分析為了初步分析ThPP2C基因的逆境脅迫應答功能，利用qＲT-PCＲ技術(shù)分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA脅迫處理后剛毛檉柳根和葉中ThPP2C基因相對表達情況(圖4)。結(jié)果顯示:在NaCl處理后，，根中ThPP2C基因表達在脅迫早期(6h)明顯受抑制(僅為對照的3．8%)，隨后被上調(diào)表達，脅迫48h時表達量最高，為對照的3．80倍。葉中所有時間點都表現(xiàn)為下調(diào)表達，其中24h時表達量最低，僅為對照的2．3%。與NaCl脅迫不同，PEG處理后根中ThPP2C基因的表達均398植物研究37卷
【作者單位】： 東北林業(yè)大學林木遺傳育種國家重點實驗室;
【基金】：黑龍江省教育廳科學技術(shù)研究項目(12523017)~~
【分類號】：Q943.2;S793.5

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本文編號：2546075