發(fā)布時間：2019-09-10 17:20

【摘要】：原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,發(fā)病率、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高,死亡率高,預(yù)后不理想。因此,肝癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和預(yù)防復(fù)發(fā),對于臨床治療和預(yù)后有非常重要的意義。形成素樣蛋白(FMNL-2)和基質(zhì)金屬酶(MMP-2)都參與了原發(fā)性肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制。FMNL-2可以調(diào)控肌動蛋白骨架的結(jié)構(gòu)改變以及偽足運(yùn)動。MMP-2通過酶解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜蛋白膠原,與腫瘤細(xì)胞突破基底膜屏障密切相關(guān)。研究表明,FMNL-2導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞遷移是通過Rho相關(guān)信號通路實(shí)現(xiàn)的。細(xì)胞遷移過程中FMNL-2參與Rho相關(guān)蛋白Cdc42板狀偽足的延長。另有研究表明,原發(fā)性肝癌細(xì)胞中Rock2調(diào)控MMP2對其侵襲遷移的作用。本實(shí)驗(yàn)組前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明FMNL-2對MMP-2存在調(diào)控關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)通過基因沉默技術(shù)下調(diào)FMNL-2,以及Y27632阻斷Rho GTPases時,分別檢測Rho A、Racl、Cdc42、MMP-2蛋白的變化以及m RNA的變化,從而判斷FMNL-2調(diào)控MMP-2是否通過Rho GTP酶通路。為以Rho信號通路為靶標(biāo)的抗腫瘤藥物的研發(fā)提供理論依據(jù)。目的:確認(rèn)FMNL-2和MMP-2之間的關(guān)系,明確FMNL-2是否通過Rho GTPases途徑調(diào)控MMP-2。方法:1、應(yīng)用基因沉默技術(shù)構(gòu)建FMNL-2低表達(dá)的肝癌細(xì)胞株;以MHCC 97H肝癌細(xì)胞株作為空白對照組,檢測兩種細(xì)胞株FMNL-2和MMP-2基因和蛋白的表達(dá),以確定兩者之間的調(diào)控關(guān)系。2、檢測低表達(dá)組、MHCC 97H兩種肝癌細(xì)胞株Rho A,Rac1,Cdc42三種基因的表達(dá)情況,以驗(yàn)證Rho GTPases是FMNL-2的下游調(diào)控路徑。另外,通過Rho A,Rac1,Cdc42三種基因的表達(dá)情況差異,篩選出具體的下游基因。3、通過Y27632抑制Rho GTPases后,以MHCC 97H作為對照組,檢測FMNL-2和MMP-2的表達(dá),以驗(yàn)證Rho GTPases和MMP-2的關(guān)系。從而解釋FMNL-2調(diào)控MMP-2的表達(dá)是否通過Rho GTPases途徑。結(jié)果:1、si RNA下調(diào)MHCC 97H細(xì)胞中FMNL-2表達(dá)后,MMP-2表達(dá)相應(yīng)下降。同時Rac1表達(dá)也相應(yīng)下調(diào)。western blot和rt-PCR結(jié)果均顯示FMNL-2下調(diào)后,MMP-2的表達(dá)下降,且差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明FMNL-2可以調(diào)控MMP-2的表達(dá)。另外,FMNL-2下調(diào)后,Rho GTPases中的Rho A無變化,Cdc42略下降,但差值沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而Rac1 m RNA表達(dá)下降顯著,差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、Y27632選擇性抑制MHCC 97H細(xì)胞中Rac1的活性。用30μmol/L的Y27632處理的MHCC 97H細(xì)胞中,活化的Rac1蛋白表達(dá)相對正常對照組顯著下降,差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、MHCC 97H細(xì)胞中Rac1表達(dá)下調(diào)后,MMP-2的表達(dá)下調(diào)。Western blot結(jié)果顯示Rac1活性降低后,MMP-2的蛋白表達(dá)相對正常對照組顯著下降,差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、Rac1可能是FMNL-2的下游調(diào)控靶基因;2、FMNL-2通過Rac1調(diào)控MHCC 97H細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)。
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果.01），說明當(dāng) FMNL-2 表達(dá)下調(diào)后，MMP-2 的表達(dá)也相應(yīng)下調(diào)L-2 對 MMP-2 的表達(dá)具有調(diào)控作用。（圖 3.2） 3.1 各組細(xì)胞中 FMNL-2 和 MMP-2 的 mRNA 灰度比值（n＝3， x ±sFMNL-2 MMP-2A B C* D E 0.86±0.03 0.90±0.10 0.24±0.02 1.44±0.04 1.17±0.05

第 3 章 結(jié)果siRNA-FMNL2 轉(zhuǎn)染組灰度比值見表 3.2。結(jié)果顯示：FMNL-2 和 MMP-2 蛋白表達(dá)在 siRNA 干擾組中明顯低于正常對照組和陰性對照組（*P<0.05）。（圖 3.3）Rt-PCR 結(jié)果和 western blot 結(jié)果都說明，當(dāng) FMNL-2 表達(dá)下調(diào)后，MMP-2的表達(dá)也相應(yīng)下調(diào)，，由此推論 FMNL-2 對 MMP-2 的表達(dá)具有調(diào)控作用。表 3.2 siRNA 干擾前后 FMNL-2、MMP-2 與 βactin 蛋白表達(dá)比值（n＝3， x ±s）normal group negative group siRNA-FMNL-2 groupFMNL-2 1.2±0.04 1.1±0.06 0.44±0.02MMP-2 0.8±0.03 0.82±0.04 0.28±0.02
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張震元;日本開發(fā)促紅細(xì)胞形成素EPO[J];生物工程進(jìn)展;1987年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 曾良濤;形成素樣基因2通過Rho GTPases信號通路調(diào)控基質(zhì)金屬酶2在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)[D];南昌大學(xué);2016年

本文編號：2534144