【摘要】：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)是植物對(duì)非生物脅迫適應(yīng)機(jī)制的一個(gè)重要方面,轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子在脅迫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá),在建立植物對(duì)脅迫適應(yīng)性過(guò)程中起到重要作用。DREB是功能多樣的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子蛋白家族,家族成員在植物響應(yīng)非生物脅迫方面扮演著重要角色。本研究以苜蓿MsDREB1基因?yàn)槟康幕?分別把MsDREB1克隆到35S啟動(dòng)子與rd29A啟動(dòng)子之后,并把兩種載體用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)入大豆基因組中,通過(guò)Southern檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株。15 d齡的幼苗在200 mmol·L~(-1)NaCl脅迫條件下,用RT-PCR分析基因不同時(shí)間的表達(dá)差異;并測(cè)定葉綠素、丙二醛、H_2O_2、SOD、相對(duì)根長(zhǎng)及相對(duì)地上部分長(zhǎng)度。結(jié)果表明:轉(zhuǎn)MsDREB1基因在兩種啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下均有一定耐鹽能力,但存在差異。在非脅迫下35S啟動(dòng)子調(diào)控的MsDREB1為超量表達(dá),而rd29A啟動(dòng)子調(diào)控MsDREB1表達(dá)量較低;在鹽脅迫下,rd29A:MsDREB1表達(dá)量高于35S:MsDREB1的表達(dá)量;MsDREB1超量表達(dá)抑制植株正常生長(zhǎng)。MsDREB1誘導(dǎo)表達(dá)耐鹽性效果更明顯,其植株脯氨酸含量、SOD活性均顯著高于MsDREB1超量表達(dá),而H_2O_2和MDA含量則顯著低于MsDREB1超量表達(dá)。結(jié)果說(shuō)明MsDREB1作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子參與了植物的滲透調(diào)節(jié),對(duì)植物的耐鹽性具有貢獻(xiàn)。該試驗(yàn)研究?jī)煞N啟動(dòng)子調(diào)控的轉(zhuǎn)MsDREB1基因大豆耐鹽效果,為MsDREB1基因在大豆耐鹽基因工程中的應(yīng)用提供參考。
【圖文】：

畬蠛斕?苜蓿MsDＲEB1基因的誘導(dǎo)表達(dá)增強(qiáng)大豆的耐鹽性19表1引物序列Table1Primersequences名稱Name引物序列Primersequence(5'-3')rd29A(F)-P1CGGATCCGCCATAGATGCAATTCAATCAAACTrd29A(Ｒ)-P2GGGTACCCCAAAGATTTTTTTCTTTCCAATAGAAGMsDＲEB1(F)-P3CGGTACCACACCATTTTCCACTCTATCCMsDＲEB1(Ｒ)-P4GCTGCAGTTTCCTATTCTACGATCCAAAＲT-qPCＲMsDＲEB1(F)-P5CCCTTTGACGCATCATCACCＲT-qPCＲMsDＲEB1(Ｒ)-P6TTCCTCCCTGCTCGCTTCTTＲT-qPCＲACTIN2(F)-P7TGATGGTGTGAGTCACACTGTACCＲT-qPCＲACTIN2(Ｒ)-P8GGACAATGGATGGGCCAGACTC圖1重組表達(dá)載體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖Fig．1Constructionoftransgenicplantexpressionvector1．4．2轉(zhuǎn)基因MsDＲEB1mＲNAＲT-qPCＲ分析檢測(cè)對(duì)擴(kuò)繁后PCＲ與Southernblot顯示陽(yáng)性植株(處理后)作外源基因表達(dá)量分析。以T2代純合體4個(gè)轉(zhuǎn)基因株系(rd-1/rd-2、35S-1/35S-2)及對(duì)照苗葉片為檢測(cè)材料，每個(gè)株系檢測(cè)3株苗。用Trizol試劑(Invitrogen公司)提取轉(zhuǎn)基因大豆的葉樣品ＲNA。用紫外分光度計(jì)測(cè)定260nm/280nm，計(jì)算ＲNA的濃度。參照SMAＲTcDNAsynthesisKit說(shuō)明書合成cDNA第一鏈。qPCＲ在ABI7300實(shí)時(shí)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。使用試劑為PowerSybrGreenPCＲ試劑(ABI)。用P5、P6和P7、P8(表1)熒光定量PCＲ引物。反應(yīng)體系參考文獻(xiàn)進(jìn)行［25］。各反應(yīng)均3次重復(fù)，采用相同條件。基因拷貝數(shù)的定量方法采用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法［25］。1．4轉(zhuǎn)基因大豆耐鹽性分析選取轉(zhuǎn)基因及對(duì)照種子，26℃萌發(fā)，水培至“兩葉一心”時(shí)期，轉(zhuǎn)移入200mmol·L－1NaCl處理6，12，24h后用清水洗凈植株，提取ＲNA并通過(guò)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得cDNA。qＲT-PCＲ測(cè)定基因的表達(dá)量。將小苗轉(zhuǎn)移到水培營(yíng)養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)約7d。將轉(zhuǎn)基因和野生型大豆分成2組。一組在新鮮的

20大豆科學(xué)1期圖2大豆轉(zhuǎn)MsDＲEB1基因Southern雜交分析Fig．2SouthernblotanalysisfromtransgeniclineswithexpressionMsDＲEB1genesinsoybean2．2轉(zhuǎn)基因各株系MsDＲEB1表達(dá)量分析為比較啟動(dòng)子調(diào)控目的基因效果，在不同程度的鹽脅迫下，對(duì)4個(gè)轉(zhuǎn)基因株系(rd-1/rd-2、35S-1/35S-2)PCＲ及Southernblot陽(yáng)性(圖2)苗Ｒeal-timePCＲ檢測(cè)(圖3)。轉(zhuǎn)MsDＲEB1株系外源基因均能表達(dá)，但由于啟動(dòng)子不同，基因表達(dá)量存在較大差異。未經(jīng)脅迫誘導(dǎo)，35S啟動(dòng)子調(diào)控的Ms-DＲEB1為超表達(dá)，相對(duì)表達(dá)量顯著高于rd29A啟動(dòng)子調(diào)控的MsDＲEB1表達(dá)量。經(jīng)不同濃度鹽脅迫處理后，MsDＲEB1表達(dá)量均增加，但rd29A啟動(dòng)子調(diào)控的MsDＲEB1表達(dá)量增加明顯高于35S啟動(dòng)子調(diào)控表達(dá)量。由此表明，rd29A誘導(dǎo)啟動(dòng)子比35S組成型啟動(dòng)子更有利于在鹽脅迫下調(diào)控基因表達(dá)。圖3轉(zhuǎn)基因大豆各株系200mmol·L－1NaCl脅迫處理下不同時(shí)間MsDＲEEB1表達(dá)變化Fig．3ChangeofMsDＲEEB1genesexpressioninwildtype(WT)，35S-，rd-linesundersaltstresstreatment2．3不同啟動(dòng)子轉(zhuǎn)基因大豆耐鹽性差異分析選取PCＲ陽(yáng)性植株，經(jīng)鹽脅迫處理。rd29A啟動(dòng)子調(diào)控的轉(zhuǎn)基因大豆長(zhǎng)勢(shì)明顯好于35S，，主要表現(xiàn)在生根較快，地上部分生長(zhǎng)迅速(圖4)。推測(cè)CaMV-35S調(diào)控的外源基因持續(xù)超量表達(dá)抑制植株生長(zhǎng)，與Chen等［27］在大豆中研究結(jié)果相似［27］。轉(zhuǎn)錄因子在組成型強(qiáng)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下異源超表達(dá)，即使在正常生長(zhǎng)條件下，也會(huì)啟動(dòng)基因表達(dá)。這種錯(cuò)誤基因表達(dá)常造成轉(zhuǎn)基因植株在正常生長(zhǎng)條件下株型變異和植株矮小［8］。*表示相同處理?xiàng)l件下不同轉(zhuǎn)基因株系與對(duì)照差異顯著(P＜0．05)。下同。*indicatethesignificantdifferenceat0．05leveloftransgenicplantwithwildtypeinthesamecon-
【作者單位】： 黃淮學(xué)院生物與食品工程學(xué)院;
【基金】：河南省科技發(fā)展計(jì)劃(112300410042)
【分類號(hào)】：S565.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 陶怡;王盈閣;李鴻杰;李晚忱;付鳳玲;;植物脫落酸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的上游信使[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2016年09期

2 趙璞;李夢(mèng);及增發(fā);賈銀鎖;馬春紅;;植物干旱響應(yīng)生理對(duì)策研究進(jìn)展[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2016年15期

3 呂兆勇;趙春梅;薛仁鎬;;葡萄逆境脅迫誘導(dǎo)啟動(dòng)子的克隆及表達(dá)分析[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);2016年01期

4 聶利珍;于肖夏;李國(guó)婧;孫杰;姜超;于卓;;Rd29A啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)AtCDPK1基因轉(zhuǎn)化馬鈴薯的研究[J];中國(guó)生物工程雜志;2015年11期

5 李聰;郭夢(mèng)陽(yáng);韓烈保;;轉(zhuǎn)OjDREB基因提高煙草耐鹽能力的研究[J];中國(guó)煙草學(xué)報(bào);2012年04期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 井大煒;張紅;李士平;王明友;;干旱脅迫對(duì)豇豆品質(zhì)與抗氧化酶活性的影響[J];長(zhǎng)江蔬菜;2017年04期

2 李大紅;蔣炳伸;鄔海燕;李鴻雁;;苜蓿MsDREB1基因的誘導(dǎo)表達(dá)增強(qiáng)大豆的耐鹽性[J];大豆科學(xué);2017年01期

3 田曉涵;龐學(xué)兵;祝建波;朱新霞;;過(guò)表達(dá)天山雪蓮SikCDPK1基因提高轉(zhuǎn)基因煙草耐低溫能力的機(jī)制初探[J];中國(guó)煙草學(xué)報(bào);2016年06期

4 井大煒;張紅;李士平;王明友;;干旱脅迫對(duì)扁豆生長(zhǎng)與生理特性的影響[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào);2016年24期

5 趙燕昊;曹躍芬;孫威怡;戎均康;;小麥抗旱研究進(jìn)展[J];植物生理學(xué)報(bào);2016年12期

6 李雪妹;劉暢;劉倩雯;張煜笛;李雪梅;;PEG預(yù)處理對(duì)水分脅迫下水稻葉片抗氧化酶同工酶及其表達(dá)的影響[J];作物雜志;2016年06期

7 劉愛榮;張遠(yuǎn)兵;張雪平;葉梅榮;詹秋文;;麥冬生長(zhǎng)及相關(guān)生理代謝對(duì)NaCl脅迫的響應(yīng)[J];草地學(xué)報(bào);2016年01期

8 吳茜;王仕穩(wěn);曹丹;陳道鉗;張梅娟;鄧西平;殷俐娜;;超表達(dá)擬南芥2-烯醛還原酶基因?qū)煵菘购敌缘淖饔脵C(jī)理分析[J];西北植物學(xué)報(bào);2015年06期

9 季愛加;羅紅梅;徐志超;張?chǎng)?宋經(jīng)元;陳士林;;藥用植物轉(zhuǎn)錄因子AP2/ERF研究與展望[J];科學(xué)通報(bào);2015年14期

10 梁紅艷;;新疆三芒草DREB基因片段的克隆[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年11期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐佳寧;徐艷群;嚴(yán)振;張利云;高建偉;;番茄對(duì)非生物脅迫響應(yīng)機(jī)制研究進(jìn)展[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年12期

2 雒雅婧;李杰;張爽;杜克久;;植物啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J];北方園藝;2015年22期

3 齊恩芳;賈小霞;馬勝;文國(guó)宏;胡新元;龔成文;王一航;李建武;;擬南芥誘導(dǎo)型啟動(dòng)子rd29A的克隆及其功能鑒定[J];干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究;2015年04期

4 張永福;黃鶴平;銀立新;陳澤斌;劉佳妮;彭聲靜;;冷(熱)激對(duì)干旱脅迫下玉米活性氧清除及膜脂過(guò)氧化的調(diào)控機(jī)制[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年05期

5 陳思奕;王佩茹;;脫落酸對(duì)植物耐旱性的影響研究概述[J];生物學(xué)教學(xué);2015年05期

6 湯方;涂慧珍;;真核啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J];林業(yè)科技開發(fā);2015年02期

7 馬義虎;楊祥田;;高溫脅迫對(duì)水稻的影響及其對(duì)策的研究進(jìn)展[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2015年09期

8 聶利珍;于肖夏;李國(guó)婧;鞠天華;孫瑞芬;崔闊澍;于卓;;擬南芥AtCDPK1基因克隆與轉(zhuǎn)化馬鈴薯的研究[J];西北植物學(xué)報(bào);2015年03期

9 劉輝;王濤濤;張俊紅;歐陽(yáng)波;李漢霞;;番茄NAC轉(zhuǎn)錄因子SlNAC80的克隆及表達(dá)分析[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);2015年01期

10 姜淑欣;劉黨校;龐紅喜;呂金印;;PEG脅迫及復(fù)水對(duì)不同抗旱性小麥幼苗脯氨酸代謝關(guān)鍵酶活性的影響[J];西北植物學(xué)報(bào);2014年08期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡紅梅;第6屆世界大豆研究會(huì)議[J];世界農(nóng)業(yè);2000年03期

2 劉鳳菊;2000年我國(guó)大豆產(chǎn)需分析[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)信息快訊;2000年08期

3 陳清一;關(guān)于發(fā)展新疆大豆生產(chǎn)的意見[J];新疆農(nóng)業(yè)科技;2000年04期

4 李瑩;大豆生產(chǎn) 前景廣闊[J];山西農(nóng)業(yè);2000年05期

5 邢海軍;;對(duì)我省實(shí)施大豆工程的分析與思考[J];種子世界;2000年04期

6 周進(jìn)寶;萬(wàn)永紅;趙雙進(jìn);張孟臣;;我省大豆生產(chǎn)存在的問(wèn)題及解決對(duì)策[J];種子世界;2000年11期

7 秦國(guó)勛,方賢星,夏新媛,諶運(yùn)清;加強(qiáng)對(duì)進(jìn)口大豆的檢驗(yàn)檢疫[J];植物檢疫;2001年05期

8 信玉真;今年美國(guó)大豆收成將比去年增長(zhǎng)11%[J];大豆通報(bào);2001年05期

9 白木,周潔;我國(guó)大豆生產(chǎn)加工現(xiàn)狀綜述[J];吉林農(nóng)業(yè);2001年10期

10 劉新錄 ,左孟孝;發(fā)展內(nèi)蒙古大豆生產(chǎn)的對(duì)策建議[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)信息快訊;2001年11期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 孫鐵男;商紹剛;;當(dāng)前我省大豆生產(chǎn)中的幾個(gè)問(wèn)題及其采取的應(yīng)對(duì)措施[A];老專家2008年建言獻(xiàn)策選編[C];2009年

2 秦富;孫立新;白人樸;;我國(guó)大豆的比較優(yōu)勢(shì)、競(jìng)爭(zhēng)力及對(duì)策[A];提高我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)力思路與對(duì)策——中國(guó)農(nóng)業(yè)技術(shù)經(jīng)濟(jì)研究會(huì)第七次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2002年

3 耿臻;楊青春;苑保軍;呂廣倫;張東輝;李偉峰;;發(fā)展專用大豆生產(chǎn)推動(dòng)產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程[A];’2003中國(guó)作物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)文集[C];2003年

4 楊文鈺;雍太文;任萬(wàn)軍;樊高瓊;牟錦毅;盧學(xué)蘭;;發(fā)展中國(guó)南方套作大豆的背景與對(duì)策[A];作物逆境生理研究進(jìn)展——中國(guó)作物生理第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)文集[C];2007年

5 楊文鈺;雍太文;任萬(wàn)軍;樊高瓊;牟錦毅;盧學(xué)蘭;;發(fā)展南方套作大豆的背景和對(duì)策[A];中國(guó)作物學(xué)會(huì)栽培專業(yè)委員會(huì)換屆暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

6 劉超;;加強(qiáng)有機(jī)大豆基地管理開拓國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)[A];黑龍江省首屆青年科技工作者論壇黑龍江省農(nóng)場(chǎng)管理學(xué)會(huì)分會(huì)場(chǎng)實(shí)施五大戰(zhàn)略推進(jìn)三化進(jìn)程構(gòu)建和諧農(nóng)場(chǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文專輯[C];2007年

7 劉忠科;楊凌舒;楊宏寶;楊志;吳軍;吳朔;王延昌;蘇文武;李大為;李恩鍵;任曉穎;劉霽萱;;增施硅、鈣元素肥料對(duì)大豆抗御不良?xì)庀蠹霸霎a(chǎn)作用[A];第23屆全國(guó)大豆科研生產(chǎn)研討會(huì)論文摘要集[C];2012年

8 屈曉s

本文編號(hào)：2533993