發(fā)布時間：2019-09-10 10:44

【摘要】：目的:研究獨行菜強(qiáng)心苷生物合成途徑的相關(guān)基因,從獨行菜幼苗葉片中克隆強(qiáng)心苷生物合成途徑關(guān)鍵酶乙酰CoA�；D(zhuǎn)移酶(acetyl-CoA C-acetyltransferase,AACT)基因,進(jìn)行序列分析和原核表達(dá)。方法:根據(jù)獨行菜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中LaAACT基因序列設(shè)計特異性引物,克隆得到LaAACT基因的cDNA序列,構(gòu)建pET-32a-LaAACT原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)LaAACT重組蛋白。結(jié)果:LaAACT基因ORF全長為1 212 bp,編碼403個氨基酸。序列分析結(jié)果顯示LaAACT蛋白沒有跨膜區(qū),不含信號肽,位于細(xì)胞質(zhì)中,含有硫解酶家族保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化結(jié)果顯示LaAACT蛋白與十字花科植物的AACT蛋白親緣關(guān)系較近。通過IPTG誘導(dǎo),在大腸埃希菌中成功表達(dá)LaAACT重組蛋白,并得到了純化的LaAACT重組蛋白。結(jié)論:首次從獨行菜幼苗葉片中克隆了LaAACT基因,建立其穩(wěn)定的原核表達(dá)體系,為LaAACT蛋白抗體的制備,進(jìn)一步研究LaAACT基因在獨行菜強(qiáng)心苷生物合成途徑中的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院;呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心;黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院;
【基金】：國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃“973計劃”項目(2013CB531802) 河南省科技攻關(guān)計劃項目(162102310468) 河南中醫(yī)學(xué)院博士科研基金項目(BSJJ2011-07)
【分類號】：Q943.2;S567.2

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10 姜旭;百合無癥病毒16kDα基因的克隆、原核表達(dá)及亞細(xì)胞定位[D];大連理工大學(xué);2015年

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本文編號：2533980