發(fā)布時間：2019-09-10 10:44

【摘要】：目的:研究獨行菜強心苷生物合成途徑的相關基因,從獨行菜幼苗葉片中克隆強心苷生物合成途徑關鍵酶乙酰CoA酰基轉(zhuǎn)移酶(acetyl-CoA C-acetyltransferase,AACT)基因,進行序列分析和原核表達。方法:根據(jù)獨行菜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中LaAACT基因序列設計特異性引物,克隆得到LaAACT基因的cDNA序列,構建pET-32a-LaAACT原核表達載體,誘導表達LaAACT重組蛋白。結(jié)果:LaAACT基因ORF全長為1 212 bp,編碼403個氨基酸。序列分析結(jié)果顯示LaAACT蛋白沒有跨膜區(qū),不含信號肽,位于細胞質(zhì)中,含有硫解酶家族保守結(jié)構域。系統(tǒng)進化結(jié)果顯示LaAACT蛋白與十字花科植物的AACT蛋白親緣關系較近。通過IPTG誘導,在大腸埃希菌中成功表達LaAACT重組蛋白,并得到了純化的LaAACT重組蛋白。結(jié)論:首次從獨行菜幼苗葉片中克隆了LaAACT基因,建立其穩(wěn)定的原核表達體系,為LaAACT蛋白抗體的制備,進一步研究LaAACT基因在獨行菜強心苷生物合成途徑中的功能奠定了基礎。
【作者單位】： 河南中醫(yī)藥大學藥學院;呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心;黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院;
【基金】：國家重點基礎研究發(fā)展計劃“973計劃”項目(2013CB531802) 河南省科技攻關計劃項目(162102310468) 河南中醫(yī)學院博士科研基金項目(BSJJ2011-07)
【分類號】：Q943.2;S567.2

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