【摘要】：葡萄作為全球范圍內(nèi)重要的經(jīng)濟(jì)類果樹,被廣泛應(yīng)用于鮮食、制汁和釀酒。歐洲葡萄無(wú)核白(Vitis vinifera cv.‘Thompson Seedless’)是栽培最廣泛的制干與鮮食品種,在生產(chǎn)中具有重要地位。電壓依賴性陰離子通道蛋白(voltage-dependent anion channels,VDAC)是線粒體外膜上含量最高的蛋白,在線粒體外膜與細(xì)胞質(zhì)之間具有調(diào)控代謝物質(zhì)進(jìn)出的功能,并且參與線粒體能量代謝、線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、生長(zhǎng)發(fā)育與生殖等生命活動(dòng),具有重要的生理功能。然而有關(guān)葡萄中VDAC蛋白功能的研究鮮見報(bào)導(dǎo)。為了進(jìn)一步研究無(wú)核白葡萄中VDAC蛋白質(zhì)的功能,本研究對(duì)VvVDAC基因家族6個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄水平,VvVDAC基因家族蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu),亞細(xì)胞定位特性,水楊酸(SA)處理下各VvVDAC基因家族蛋白瞬時(shí)表達(dá)的生物學(xué)功能進(jìn)行了研究,取得的主要結(jié)果如下:1.預(yù)測(cè)的VvVDAC基因家族蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)表明:除VvVDAC6.1與VvVDAC6.2不含α-螺旋結(jié)構(gòu)的N端外,其余成員均由β-折疊桶與α-螺旋結(jié)構(gòu)的N端構(gòu)成保守的通道蛋白結(jié)構(gòu),家族成員中的β-折疊片數(shù)量在9-19個(gè)之間。VvVDAC3、VvVDAC5氨基酸序列包含典型真核生物線粒體通道蛋白標(biāo)志性結(jié)構(gòu)域(MPS)。原生質(zhì)體亞細(xì)胞定位結(jié)果表明:VvVDAC3與VvVDAC4定位于線粒體上,VvVDAC1.1與VvVDAC5定位于線粒體及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)其他部位,表明無(wú)核白葡萄VvVDAC蛋白質(zhì)線粒體定位特性并不完全取決于MPS結(jié)構(gòu)域,或同時(shí)受其他結(jié)構(gòu)域影響。2.VvVDAC基因家族瞬時(shí)轉(zhuǎn)化模式植物煙草(Nicotiana benthamiana)葉片,并且對(duì)葉片進(jìn)行了SA處理,結(jié)果表明:VvVDAC1.1是主要的響應(yīng)SA引起的過(guò)氧化氫積累的線粒體通道蛋白;過(guò)氧化氫積累不能引起VvVDAC介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。3.提取無(wú)核白葡萄根、莖、葉、卷須及花組織中的總RNA,采用RT-PCR分別檢測(cè)了VvVDAC基因家族6個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄水平,結(jié)果表明:VvVDAC1(轉(zhuǎn)錄生成VvVDAC1.1及VvVDAC1.2這一對(duì)可變剪接)在各個(gè)組織中的轉(zhuǎn)錄水平最高;只有VvVDAC6.2在莖中表達(dá),表明VvVDAC6.2的轉(zhuǎn)錄具有組織特異性。
【圖文】：

圖 2-3 MPS 結(jié)構(gòu)域在無(wú)核白葡萄、煙草、擬南芥 VDAC 氨基酸序列中的比對(duì). 2-3 Amino acid sequence alignment of MPS motif in VDACs from ‘Thompson See(V.vinifera), N. tabacum and A. thaliana. 無(wú)核白葡萄 VDAC 基因家族蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)及 MPS 結(jié)構(gòu)域定位

圖 2-4 無(wú)核白葡萄 VDAC 基因家族蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)VvVDAC 蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)通過(guò) SWISS-MODEL 在線預(yù)測(cè)系統(tǒng)模擬獲得（瑞士生物信研究所，，http://swissmodel.expasy.org/）。Fig. 2-4 Three-dimensional structure of the VvVDACs proteins from Vitis vinifera cv.‘Thompson Seedless’The 3D structure of VvVDACs proteins was simulated using the SWISS-MODEL soft
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S663.1

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本文編號(hào)：2529912