【摘要】：GGP(GDP-L-galactose phosphorylase)參與植物AsA合成過程。本研究以甜櫻桃‘佐藤錦’(Satonishiki)為材料,采用PCR法,首次在甜櫻桃上克隆了AsA合成相關(guān)基因PacGGP1和PacGGP2,基因片段長度分別為1 297 bp和1 765 bp,分別包含1 107 bp和1 341 bp,并分別編碼368和446個(gè)氨基酸。通過氨基酸序列比對結(jié)果發(fā)現(xiàn),與甜櫻桃PacGGP1同源性較高的是棗GGP1,相似度100%,與甜櫻桃PacGGP2同源性較高的是碧桃GGP2,相似度在98%左右。采用RT-PCR方法分析了PacGGP1和PacGGP2的表達(dá)模式。研究表明PacGGP2基因在‘佐藤錦’甜櫻桃品種中的表達(dá)變化模式與T-AsA的含量變化趨勢表現(xiàn)出明顯的相似性,推測它可能是AsA L-半乳糖合成途徑中的關(guān)鍵基因,可為甜櫻桃分子育種奠定重要基礎(chǔ)。
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圖片說明： ningofGGPGeneandItsExpressionAnalysisduringFruitDevelopmentfromPrunusaviumL.冰箱-80℃?zhèn)溆?.2RNA提娶基因克隆以甜櫻桃果實(shí)為材料，提取總RNA，-80℃保存。利用同源克隆法設(shè)計(jì)PCR引物(表1)。以總RNA為模板，，反轉(zhuǎn)錄合成的第一鏈cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，切膠，回收目的條帶，連接pMD19-T克隆載體并測序，DNA測序成都擎科生物公司完成。所得序列用Blast搜索引擎在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源性查找。測序后的目的基因片段用DNAs-tarEditSeq軟件去除載體序列后拼接獲得cDNA全圖2GGP1(A)和GGP2(B)基因推導(dǎo)的氨基酸與其他植物的系統(tǒng)發(fā)育樹注:A:GGP1基因推導(dǎo)的氨基酸與其他植物的系統(tǒng)發(fā)育樹;B:GGP2基因推導(dǎo)的氨基酸與其他植物的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure2PhylogenetictreeofthededucedaminoacidsequencesofGGP1(A)andGGP2(B)geneNote:A:PhylogenetictreeofthededucedaminoacidsequencesofGGP1;B:PhylogenetictreeofthededucedaminoacidsequencesofGGP2圖3甜櫻桃果實(shí)T-AsA含量及GGP1和GGP2基因的表達(dá)量變化注:A:甜櫻桃果實(shí)T-AsA含量(mg/100gFW);B:生長過程AsA合成途徑GGP1和GGP2基因的相對表達(dá)量變化Figure3ChangesofT-AsAconcentrationaswellasGGP1andGGP2expressionlevelsinthesweetcherryfruitNote:A:ChangesofthemainT-AsAconcentrations(mg/100gFW)inthefruits;B:ChangesofGGP1andGGP2genesinvolvedAsAbiosynthesissystemduringfruitgrowthofP.avium長，并分析目的基因全長cDNA序列的開放閱讀框，采用DNAman軟件推導(dǎo)相應(yīng)的氨基酸序列。ClustalX軟件對不同植物相關(guān)基因的氨基酸序列進(jìn)行多重比對，利用MEGA5.0軟件繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹。3.3AsA的含量測定參考Ka
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