【摘要】：Δ~9-硬脂酰-ACP脫氫酶(SAD)是決定植物體內(nèi)飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸比值的關(guān)鍵酶。以花生品種豫花9326基因組DNA為模板,通過(guò)基因組步移技術(shù),克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脫氫酶基因(Ah SAD)起始密碼子ATG上游720 bp片段,利用5'RACE方法獲得了該基因的5'UTR序列,通過(guò)序列比對(duì)確定720 bp片段為Ah SAD啟動(dòng)子區(qū)域。PLACE在線啟動(dòng)子預(yù)測(cè)分析表明,該序列具有真核生物啟動(dòng)子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,含有多個(gè)與光誘導(dǎo)和激素響應(yīng)相關(guān)順式序列元件。將Ah SAD啟動(dòng)子片段替換pBI121質(zhì)粒中的CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下游GUS基因表達(dá),構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI-PAh SAD。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化擬南芥和在花生不同組織中瞬時(shí)表達(dá),利用GUS組織化學(xué)染色研究其表達(dá)特性。表明在擬南芥和花生受體中,AhSAD啟動(dòng)子主要調(diào)控下游基因在根、莖、葉片和子葉中表達(dá),在花生的果針中也檢測(cè)到GUS活性;擬南芥的莖生葉只有葉脈中具有GUS活性,而花生整個(gè)葉片中都具有GUS活性。
[Abstract]:螖 ~ 9-stearyl-ACP dehydrogenase (SAD) is the key enzyme to determine the ratio of saturated fatty acids to saturated fatty acids in plants. Using genomic DNA of peanut variety Yuhua 9326 as template, 720 bp fragment upstream of (Ah SAD) initiation codon ATG of peanut 螖 ~ 9-stearyl-ACP dehydrogenase gene was cloned by genomic step technique. The 5'UTR sequence of peanut 螖 ~ 9-stearyl-ACP dehydrogenase gene was obtained by 5'RACE method. 720 bp fragment was identified as Ah SAD promoter region by sequence alignment. The sequence has the core elements TATA-box and CAAT-box, necessary for eukaryotic promoter to contain a number of sequence elements related to light induction and hormone response. The downstream GUS gene expression was driven by replacing the CaMV35S promoter in pBI121 plasmid with Ah SAD promoter fragment, and the plant expression vector pBI-PAh SAD. was constructed. The transient expression of Arabidopsis thaliana and peanut in different tissues was transformed by Agrobacterium tumefaciens. The expression characteristics of Arabidopsis thaliana and peanut were studied by GUS histochemical staining. The results showed that in Arabidopsis thaliana and peanut receptors, AhSAD promoter mainly regulated the expression of downstream genes in roots, stems, leaves and cotyledons, and also detected GUS activity in peanut fruit needles. Arabidopsis thaliana only had GUS activity in leaf veins, while peanut leaves had GUS activity in the whole leaf.
【作者單位】： 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所/農(nóng)業(yè)部黃淮海油料作物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/河南省油料作物遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/花生遺傳改良國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)項(xiàng)目(2013AA102602-6) 河南省重大科技專項(xiàng)(141100110600) 國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-14) 河南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項(xiàng)目(S2012-5) 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院優(yōu)秀青年基金(2013YQ11)資助~~
【分類號(hào)】：S565.2

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本文編號(hào)：2506370