【摘要】：為研究植物激素生長(zhǎng)素在模式作物水稻中的功能,我們利用CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù),設(shè)計(jì)水稻生長(zhǎng)素合成基因Os YUCCA1的兩個(gè)靶位點(diǎn),構(gòu)建Os YUCCA1基因的敲除載體。通過(guò)對(duì)Os YUCCA1基因序列分析,將合成的靶點(diǎn)序列插入含hsp Cas9n的載體中,再與p CAMBIA1300重組,構(gòu)建基因編輯載體,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化水稻品種9522。從78棵轉(zhuǎn)基因苗中鑒定得到針對(duì)Os YUCCA1的3種突變類型,包括26棵在外顯子第260號(hào)堿基處插入堿基A或T兩種類型純合突變和22棵在外顯子第447號(hào)堿基處插入A、444號(hào)堿基C被T替換、445號(hào)堿基G被C替換的雜合突變類型。通過(guò)分析,發(fā)現(xiàn)3種突變株系都存在移碼現(xiàn)象而使氨基酸提前終止致使基因突變。本研究成功利用CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)敲除了水稻Os YUCCA1基因,為進(jìn)一步研究Os YUCCA1基因功能提供了理論參考依據(jù)。
[Abstract]:In order to study the function of plant hormone auxin in model crop rice (Oryza sativa L.), we designed two target sites of rice auxin synthesis gene Os YUCCA1 by using CRISPR-Cas9 gene editing technique, and constructed the knockout vector of Os YUCCA1 gene. By analyzing the sequence of Os YUCCA1 gene, the synthesized target sequence was inserted into the vector containing hsp Cas9n, and then recombined with p-CAMBIA1300 to construct the gene editing vector, and the rice variety 9522 was transformed by Agrobacterium tumefaciens mediated method. Three mutation types of Os YUCCA1 were identified from 78 transgenic seedlings, including 26 homozygous mutations of base A or T inserted at base 260 in exons and A inserted at base 447 of exons. 444 base C was replaced by T and 445 base G was replaced by C. Through the analysis, it was found that all the three mutants had the phenomenon of transcoding, which resulted in the early termination of amino acids and the mutation of genes. In this study, CRISPR-Cas9 gene editing technique was successfully used to knock out rice Os YUCCA1 gene, which provided a theoretical reference for further study of Os YUCCA1 gene function.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【分類號(hào)】：Q943.2

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本文編號(hào)：2502693