【摘要】：【目的】馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是馬鈴薯生產(chǎn)上危害較為嚴(yán)重的病毒,也是制約馬鈴薯可持續(xù)發(fā)展的主要病毒之一。論文旨在開(kāi)發(fā)一套簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速的PVY分子鑒定技術(shù),并采用該技術(shù)及時(shí)查明福建省部分產(chǎn)區(qū)PVY病害的發(fā)生、分布及PVY株系組成。【方法】采用ELISA方法對(duì)采自福建省長(zhǎng)樂(lè)市、福清市馬鈴薯種植區(qū)疑似受PVY感染的樣品進(jìn)行檢測(cè),并根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的PVY P1、VPg和CP基因保守區(qū)設(shè)計(jì)3對(duì)簡(jiǎn)并引物,對(duì)ELISA檢測(cè)后的陽(yáng)性樣品進(jìn)行基因擴(kuò)增、克隆,并將獲得的序列進(jìn)行核苷酸序列一致性、重組位點(diǎn)、基因型分布和系統(tǒng)發(fā)育分析。【結(jié)果】ELISA檢測(cè)結(jié)果表明,17份樣品中有13個(gè)樣品與PVY抗體呈陽(yáng)性反應(yīng),其他呈陰性反應(yīng)。13個(gè)陽(yáng)性樣品均能成功擴(kuò)增出3個(gè)與P1、VPg和CP基因預(yù)期大小一致的特異片段。BLAST比對(duì)分析顯示P1、VPg和CP基因與文獻(xiàn)報(bào)道的已知PVY分離物的核苷酸序列一致性分別為72%—99%、85%—99%和88%—99%。P1、VPg和CP 3個(gè)基因聯(lián)合序列分析顯示,FQ01分離物與PVY~(N-Wi)株系的核苷酸序列一致性最高,FQ08分離物與PVYE株系的核苷酸序列一致性最高,CL01、CL02、CL05和CL13 4個(gè)分離物與PVY~(NTN-NW)株系SYR-I型的核苷酸序列一致性最高,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12 7個(gè)分離物與PVY~(NTN-NW)株系SYR-II型的核苷酸序列一致性最高。重組分析顯示,除CP基因外,長(zhǎng)樂(lè)市和福清市兩個(gè)產(chǎn)區(qū)的PVY分離物的P1和VPg基因中均檢測(cè)到顯著的重組信號(hào)。基因型統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示,長(zhǎng)樂(lè)產(chǎn)區(qū)的P1基因?yàn)镹型(60%)和N×O重組型(40%),VPg基因均為N×O重組型,而CP基因均為O型,而福清產(chǎn)區(qū)的P1基因?yàn)镹型(25%)和N×O重組型(75%),VPg基因?yàn)镹×O重組型(87.5%)和O型(12.5%),而CP基因除了一個(gè)分離物為N型外,其他均為O型。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示分離物FQ01與PVYN-Wi株系聚為一簇,FQ08與PVYE株系聚為一簇,CL01、CL02、CL05和CL13與PVY~(NTN-NW)株系SYR-I型聚為一簇,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12與PVY~(NTN-NW)株系SYR-II型聚為一簇,表明在系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系上,分離物FQ01與PVYN-Wi株系最近,FQ08與PVYE株系最近,CL01、CL02、CL05和CL13與PVY~(NTN-NW)株系SYR-I型最近,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12與PVY~(NTN-NW)株系SYR-II型最近�！窘Y(jié)論】PVY在福建省長(zhǎng)樂(lè)市、福清市馬鈴薯種植區(qū)普遍存在,重組株系已成為田間的主流株系,且PVY~(NTN-NW)已成為優(yōu)勢(shì)重組株系。
[Abstract]:[objective] Potato Y virus (Potato virus Y, PVY, is a serious virus in potato production, and it is also one of the main viruses that restrict the sustainable development of potato. The purpose of this paper is to develop a set of simple, accurate and rapid PVY molecular identification technique, and to find out the occurrence and distribution of PVY diseases and the composition of PVY strains in some producing areas of Fujian Province in time. [methods] ELISA method was used to identify PVY diseases collected from Changle City, Fujian Province. Samples suspected of PVY infection in potato growing areas of Fuqing City were detected. According to PVY P1, VPG and CP gene conserved regions reported in the literature, three pairs of degenerate primers were designed to amplify and clone the positive samples detected by ELISA. The obtained sequences were analyzed by nucleotides sequence consistency, recombination sites, genotypic distribution and phylogeny. [results] the results of ELISA showed that 13 of the 17 samples were positive for PVY antibody. Other negative reactions. Three specific fragments of VPG and CP genes were successfully amplified from 13 positive samples, which were consistent with the expected size of P1 and VPG genes. Blast comparison analysis showed that P1, The nucleotide sequence consistency of VPg and CP genes with known PVY isolates reported in the literature was 72% 99%, 85% 99% and 88% 99%, respectively. P1. The combined sequence analysis of VPG and CP genes showed that The nucleotide sequence consistency between FQ01 isolate and PVY~ (N-Wi) strain was the highest, that between FQ08 isolate and PVYE strain was the highest, and that between FQ08 isolate and PVYE strain was the highest. The nucleotides of CL05 and CL13 isolates were the highest with PVY~ (NTN-NW) strain SYR- I, and CL03,CL04,FQ02,FQ06,FQ09,FQ11 and CL12 isolates were the highest with PVY~ (NTN-NW) strain SYR- II. The recombinant analysis showed that significant recombinant signals were detected in P1 and VPg genes of PVY isolates from Changle City and Fuqing City except CP gene. The results of genotypic statistical analysis showed that the P1 gene in Changle producing area was N type (60%) and N 脳 O recombinant type (40%), VPg gene was N 脳 O recombinant type, while CP gene was O type). The P1 gene in Fuqing area was N type (25%) and N 脳 O recombinant type (75%), VPg gene was N 脳 O recombinant type (87.5%) and O type (12.5%), while CP gene was O type except one isolate was N type. Phylogenetic analysis showed that the isolates FQ01 and PVYN-Wi, FQ08 and PVYE, CL01,CL02,CL05 and CL13 and PVY~ (NTN-NW) SYR- I, CL03,CL04,FQ02,FQ06,FQ09, were grouped into one cluster, one cluster with PVY~ (NTN-NW) strain, one cluster with PVY~ (NTN-NW) strain SYR- I, and one cluster with PVY~ (NTN-NW) strain SYR- I, CL03,CL04,FQ02,FQ06,FQ09,. FQ11 and CL12 and PVY~ (NTN-NW) lines SYR- II cluster, indicating that in the phylogenetic relationship, the isolates FQ01 and PVYN-Wi, FQ08 and PVYE, CL01,CL02,CL05 and CL13 and PVY~ (NTN-NW) were the closest, CL01,CL02,CL05 and CL13 and PVY~ (NTN-NW) lines SYR- I, respectively. CL03,CL04,FQ02,FQ06,FQ09,FQ11 and CL12 and PVY~ (NTN-NW) lines SYR- II were recent. [conclusion] PVY is common in potato growing areas of Fuqing City, Changle City, Fujian Province, and the recombinant strain has become the mainstream strain in the field. And PVY~ (NTN-NW) has become the dominant recombinant strain.
【作者單位】： 福建農(nóng)林大學(xué)植物病毒研究所/福建省植物病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-10)
【分類(lèi)號(hào)】：S435.32

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本文編號(hào)：2491492