【摘要】：石榴(Punica granatum L.)屬于石榴科石榴屬,為多年生落葉喬木或灌木,具有廣泛的經(jīng)濟(jì)價值,集食用、觀賞、綠化、藥用于一體。目前國內(nèi)外關(guān)于石榴采后品質(zhì)變化的研究較少,貯藏環(huán)節(jié)已經(jīng)成為影響石榴產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。本試驗以安徽懷遠(yuǎn)“玉石籽”為試材,研究不同溫度(0℃、5℃、10℃、15℃)處理對采后不同貯期(0-56 d)石榴籽粒可溶性糖、可滴定酸、VC、花青苷、總酚及總黃酮的含量變化的影響,同時利用RACE技術(shù)克隆花青苷合成相關(guān)基因(F3'5'H、CHI、CHS)和乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因(ERF、ETR),然后利用RT-PCR技術(shù)分析其在不同溫度貯期石榴籽粒中的表達(dá)特性。探討石榴采后品質(zhì)變化的生理及分子機(jī)理,為石榴采后貯藏保鮮提供了理論依據(jù)。主要結(jié)果如下:1、分析不同溫度處理條件下不同貯期石榴籽粒的品質(zhì)變化。(1)可溶性糖含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,0℃和5℃均在28 d左右達(dá)到最高峰,10℃和15℃均在14 d左右達(dá)到最高峰。(2)在0℃條件下,可滴定酸含量于28 d達(dá)到最高值后顯著下降;5℃和10℃時可滴定酸含量整體處于穩(wěn)定水平;15℃時可滴定酸含量呈不斷上升趨勢。(3)在0℃時VC含量無明顯變化;5℃、10℃和15℃時VC在14d前快速積累,之后處于穩(wěn)定階段。(4)不同溫度(0℃、5℃、10℃、15℃)條件下,花青苷含量不斷上升至最大值,分別為0 d的2.03倍、2.88倍、3.25倍和4.17倍。(5)在0℃和10℃是總酚含量無明顯變化;5℃時總酚含量于14 d之前顯著下降,之后一直處于穩(wěn)定水平;15℃時總酚含量呈不斷上升趨勢。(6)不同溫度(0℃、5℃、10℃和15℃)條件下,總黃酮含量呈先上升后下降的趨勢,均于42 d達(dá)到最大值,分別為0 d的1.25倍、1.06倍、1.69倍和1.56倍。2、獲得花青苷合成相關(guān)基因PgF3'5'H、PgCHI、PgCHS的cDNA全長序列。(1)PgF3'5'H基因(Gen Bank登錄號:KU058892)全長cDNA為1199bp,開放閱讀框918bp,編碼305個氨基酸,在N端36~39處含有P450家族基因的特征保守序列(CYP基序“PPGP”);生物信息學(xué)表明,該基因編碼的氨基酸序列與巨桉的Eg F3'5'H2、麻風(fēng)樹的Jc F3'5'H2、荷花的Nn F3'5'H2一致性分別高達(dá)86%、82%和81%。(2)PgCHI基因(Gen Bank登錄號為KU058887)全長cDNA為1154bp,開放閱讀框693bp,編碼230個氨基酸;生物信息學(xué)表明,該氨基酸序列與芍藥Pl CHI、金花茶Cn CHI和野茶樹Cs CHI的氨基酸一致性均高達(dá)80%以上。(3)PgCHS基因(Gen Bank登錄號為KU058888)全長cDNA為1676bp,開放閱讀框1197bp,編碼398個氨基酸,該蛋白含有其他CHS蛋白普遍具有的兩個保守域,即cd00831和PLN03173,還具有查耳酮合酶家族的特征序列:RLMMYQQGCFAGGTVLR;生物信息學(xué)表明,該氨基酸序列與龍眼Dl CHS、荷花Nn CHS、胡楊Pe CHS等的氨基酸序列一致性都高達(dá)93%。3、獲得乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因PgERF1、PgERF2、Pg ETR的cDNA全長序列。(1)PgERF1基因(Gen Bank登錄號為KU058889)全長cDNA為1612bp,開放閱讀框1185bp,編碼394個氨基酸;PgERF2基因(Gen Bank登錄號為KU058890)全長cDNA為1611bp,開放閱讀框1185bp,編碼394個氨基酸;PgERF1和PgERF2蛋白均含有1個DNA-binding-site結(jié)構(gòu)域,位于N端120-177氨基酸位置,為典型的AP2/ERF中心結(jié)構(gòu)域;生物信息學(xué)表明,PgERF1和PgERF2氨基酸序列與巨桉Eg ERF12、可可Tc ERF1、蘋果Md ERF12等氨基酸序列一致性都達(dá)到64%以上。(2)Pg ETR基因(Gen Bank登錄號為KU058891)全長cDNA為843bp,開放閱讀框582bp,編碼193個氨基酸;生物信息學(xué)表明,該氨基酸序列與番木瓜Cp ETR、苦瓜Mc ETR、豌豆Ps ETR等氨基酸序列一致性均高達(dá)92%。4、對花青苷合成相關(guān)基因進(jìn)行熒光定量表達(dá)分析。(1)在0℃、5℃、10℃條件下,PgF3'5'H表達(dá)量均呈上升趨勢,15℃時PgF3'5'H表達(dá)量不穩(wěn)定;PgF3'5'H基因表達(dá)與花青苷含量呈顯著正相關(guān)。(2)在0℃時PgCHI表達(dá)量于14 d后顯著上升;5℃、10℃和15℃時表達(dá)量于14 d后呈不斷下降趨勢;0℃時PgCHI基因表達(dá)與花青苷含量呈顯著正相關(guān);5℃、10℃和15℃時PgCHI基因表達(dá)與花青苷含量呈顯著負(fù)相關(guān)。(3)在0℃時PgCHS基因表達(dá)量呈不斷上升趨勢;5℃、10℃和15℃基因表達(dá)量顯著低于0℃;在0℃條件下,PgCHS基因表達(dá)與花青苷含量呈顯著正相關(guān)。5、對乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因進(jìn)行熒光定量表達(dá)分析。(1)PgERF1和PgERF2基因表達(dá)量一致性高達(dá)0.954**;在0℃條件下,2個基因表達(dá)量呈不斷上升趨勢;在5℃、10℃和15℃條件下,基因表達(dá)量整體呈先上升后下降的趨勢,分別在28 d、14 d和14 d達(dá)到最大值。(2)在0℃、5℃和10℃條件下,Pg ETR基因表達(dá)量于14 d上升至最大值,之后有不同程度的下降;在15℃條件下,Pg ETR基因表達(dá)量呈先上升后下降的趨勢,于42 d達(dá)到最大值。
[Abstract]:Pomegranate (Punica granatum L.) belongs to the Pomegranate belonging to the Pomegranate, and is a perennial tree or shrub with wide economic value, and is used as a whole for eating, viewing, greening and medicine. At present, the research on the change of postharvest quality of the pomegranate is less, and the storage link has become the bottleneck of the development of the pomegranate industry. The effects of different temperatures (0 鈩，

本文編號：2482712