【摘要】：【目的】本研究是從前期獲得的100余份轉(zhuǎn)基因抗除草劑草甘膦玉米品系中,挑選T抗-1等14個(gè)轉(zhuǎn)基因玉米品系進(jìn)行拷貝數(shù)檢測(cè)。【方法】采用一種新型的拷貝數(shù)分析方法——微滴數(shù)字PCR技術(shù)(droplet digital PCR,簡(jiǎn)稱dd PCR),設(shè)計(jì)特異引物對(duì)外源抗草甘膦基因2m G2-epsps進(jìn)行絕對(duì)定量分析�！窘Y(jié)果】供試的14份轉(zhuǎn)基因材料中10份是單拷貝品系。同時(shí),通過(guò)引物探針特異性試驗(yàn)、葉片基因組DNA的PCR抑制和濃度檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因玉米的外源基因2m G2-epsps的實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)和基因組DNA的酶切等系列研究,建立穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因玉米拷貝數(shù)分析的dd PCR檢測(cè)體系�！窘Y(jié)論】微滴數(shù)字PCR技術(shù)為這批轉(zhuǎn)基因玉米的下一步轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)提供了重要參數(shù),同時(shí)建立了轉(zhuǎn)基因玉米(genetically modified maize)外源基因拷貝數(shù)dd PCR分析方法。
[Abstract]:[objective] in this study, more than 100 transgenic herbicide-resistant glyphosate-resistant maize lines were obtained. Fourteen transgenic maize lines, such as T-resistance-1, were selected for copy number detection. [methods] A new copy number analysis method, microdrop digital PCR technique (droplet digital PCR,), was used to detect copy number of transgenic maize lines (dd PCR), for short). Specific primers were designed for absolute quantitative analysis of exogenous glyphosate resistance gene 2m G2-epsps. [results] of the 14 transgenic materials tested, 10 were single copy lines. At the same time, PCR inhibition and concentration detection of genomic DNA in leaves, real-time PCR detection of exogenous gene 2m G2-epsps and restriction enzyme digestion of genomic DNA in transgenic maize were carried out by primer probe specificity test. A stable dd PCR detection system for copy number analysis of transgenic maize was established. [conclusion] the microdrop digital PCR technique provides important parameters for the next step of transgenic biological safety assessment of these transgenic maize. At the same time, the dd PCR analysis method of foreign gene copy number of transgenic maize (genetically modified maize) was established.
【作者單位】： 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)核技術(shù)研究所;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所;
【基金】：四川省農(nóng)科院高新技術(shù)研究應(yīng)用專項(xiàng)(2016GXTZ-001);四川省農(nóng)科院財(cái)政基因工程項(xiàng)目(2016ZYPZ-003) 轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)(2014ZX0800301B)
【分類號(hào)】：S513

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本文編號(hào)：2470744