發(fā)布時(shí)間：2019-03-24 11:24

【摘要】：【目的】克隆交替假單胞菌(Pseudoalteromonas sp.)BYS-2的褐藻膠裂解酶基因,實(shí)現(xiàn)其在大腸桿菌細(xì)胞中異源表達(dá),對(duì)分離純化的重組酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究�！痉椒ā恳越惶婕賳伟鶥YS-2菌株基因組DNA為模板,克隆得到褐藻膠裂解酶基因alg738,構(gòu)建重組基因工程菌BL21(DE3)/p ET22b-alg738,誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物通過Ni-NTA樹脂純化后進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究。【結(jié)果】重組酶的最適反應(yīng)p H為8.0,在p H 6.0-9.0范圍內(nèi)37°C保溫1 h仍能保持84%以上的相對(duì)酶活力,具有較好的p H穩(wěn)定性;最適反應(yīng)溫度為45°C,熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)顯示在37°C下保溫60 min其殘余酶活力仍達(dá)66.6%;在5 mmol/L濃度下,Na~+、Mg~(2+)、Mn~(2+)對(duì)該酶具有明顯的促進(jìn)作用,Ni~(2+)、Co~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)、Zn~(2+)、EDTA、β-巰基乙醇、SDS具有明顯的抑制作用。動(dòng)力學(xué)參數(shù)Km、Vmax分別為1.11 g/L和0.011 g/(L·min),底物特異性分析表明該重組酶為偏好聚甘露糖醛酸鈉(Poly M)裂解作用的雙功能酶�！窘Y(jié)論】重組褐藻膠裂解酶具有良好的酶學(xué)特性,為褐藻膠裂解酶的開發(fā)應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to clone the alginate lyase gene of Pseudomonas alternatus (Pseudoalteromonas sp.) BYS-2 and realize its heterologous expression in E. coli cells. The enzymatic properties of the purified recombinant enzyme were studied. [methods] using genomic DNA of Pseudomonas alternans BYS-2 strain as template, the alginate lyase gene alg738, was cloned to construct recombinant gene engineering strain BL21 (DE3) / p ET22b-alg738,. The expression product was purified by Ni-NTA resin and the enzymatic properties were studied. [results] the optimal reaction pH of the recombinant enzyme was 8.0, In the range of pH 6.0 and 9.0, 37 擄C kept 84% of the relative enzyme activity for 1 h, and had good stability of pH. The optimum reaction temperature was 45 擄C, and the thermal stability test showed that the residual enzyme activity was still up to 66.6% at 37 擄C for 60 min. At the concentration of 5 mmol/L, Na~, Mg~ (2) and Mn~ (2) promoted the enzyme obviously. Ni~ (2), Co~ (2), Cu~ (2), Hg~ (2), Zn~ (2), EDTA, 尾-mercaptoethanol), SDS had obvious inhibitory effect. The kinetic parameters Km,Vmax were 1.11 g / L and 0.011 g / (L 路min), respectively. The substrate specificity analysis showed that the recombinant enzyme was a bifunctional enzyme favoring the cleavage of (Poly M) by sodium polymannose. [conclusion] the recombinant alginate lyase has good enzymatic properties, which lays a foundation for the development and application of alginate lyase.
【作者單位】： 福建省海洋酶工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福州大學(xué);
【基金】：國(guó)家海洋局海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目(No.201305015) 福建省企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目 福州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2016X0005)~~
【分類號(hào)】：Q55;Q78

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 甘純璣;甘景鎬;;一種用途廣泛的食品添加劑——褐藻膠[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1986年03期

2 嚴(yán)小軍;褐藻膠結(jié)構(gòu)的統(tǒng)計(jì)學(xué)描述及其應(yīng)用[J];海洋科學(xué);1993年05期

3 隋戰(zhàn)鷹;;褐藻膠用途多[J];植物雜志;1993年02期

4 汪立平;劉玉佩;孫曉紅;趙勇;;褐藻膠裂解酶基因在大腸桿菌中的表達(dá)及其酶學(xué)性質(zhì)[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào);2012年02期

5 范曉,張燕霞,齊桂蘭;稀酸前處理對(duì)海帶褐藻膠的提取及其質(zhì)量的影響[J];海洋科學(xué);1986年02期

6 甘純璣;鋅鹽抑制褐藻膠降解的研究[J];臺(tái)灣海峽;1987年02期

7 嚴(yán)小軍;褐藻膠的生物合成途徑與細(xì)胞學(xué)研究[J];海洋科學(xué);1993年06期

8 魏玉西,張虹,牛錫珍;巨藻生產(chǎn)褐藻膠工藝改進(jìn)方法的探討[J];海洋科學(xué);2002年06期

9 王媛媛;郭文斌;王淑芳;解慧;宋存江;;褐藻寡糖的生物活性與應(yīng)用研究進(jìn)展[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2010年10期

10 紀(jì)明侯;海藻化學(xué)名詞解釋[J];海洋科學(xué);1981年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 張淑平;方君宜;柳杰;胡佩紅;王春華;;褐藻膠降解方法的研究[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展——中國(guó)科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

2 李陶陶;許加超;付曉婷;高昕;;鈣析法和酸析法所產(chǎn)褐藻膠質(zhì)量比較的研究[A];2010年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

3 吳志軍;徐祖洪;李智恩;;褐藻酚類化合物的研究近況[A];第七屆全國(guó)海洋湖沼青年學(xué)者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2000年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 周建亮　劉會(huì)梅 郭悅;膠南成“褐藻膠之都”[N];青島日?qǐng)?bào);2010年

2 曉剛;把“海洋蔬菜”端上餐桌[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2006年

3 鄧厚群;海帶是優(yōu)質(zhì)飼料添加劑[N];湖北科技報(bào);2002年

4 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院 范志紅;藻類蔬菜——人類健康的營(yíng)養(yǎng)素[N];市場(chǎng)報(bào);2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 湯海青;用海洋細(xì)菌Pseudoalteromonas tetrodonis QZ-4發(fā)酵生產(chǎn)褐藻膠裂解酶的研究[D];浙江大學(xué);2010年

2 OJOKOH EROMOSELE;棕色固氮菌褐藻膠誘導(dǎo)大豆生成大豆抗毒素的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 王熙濤;微生物處理海帶飼料對(duì)刺參生長(zhǎng)和免疫的影響[D];大連理工大學(xué);2015年

4 王林娜;海洋細(xì)菌Shewanella sp.Kz7的寡褐藻膠裂解酶研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2014年

5 李麗妍;褐藻膠裂解酶系的酶化學(xué)、產(chǎn)物分析及應(yīng)用研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2011年

6 劉鑫;褐藻膠—魚肉蛋白質(zhì)復(fù)合凝膠體系流變特性及水分狀態(tài)的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2010年

7 馬麗艷;海洋細(xì)菌褐藻膠裂解酶在大腸桿菌中表達(dá)，，加工與轉(zhuǎn)運(yùn)及重組酶的純化與性質(zhì)研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2007年

8 韓峰;海洋弧菌QY103褐藻膠裂解酶的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2008年

9 付曉婷;海洋細(xì)菌（Agarivorans albus YKW-34）產(chǎn)生的褐藻膠裂解酶及瓊膠酶的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2008年

10 宋凱;海洋弧菌Vibrio sp. QY101褐藻膠裂解酶的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 韓文君;褐藻膠生物轉(zhuǎn)化的分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2003年

2 石榮蓮;重組褐藻膠裂解酶基因工程菌酶液制備及褐藻膠水解條件研究[D];上海海洋大學(xué);2011年

3 周久順;海洋弧菌Vibrio sp.QY102產(chǎn)褐藻膠裂解酶的發(fā)酵工藝優(yōu)化[D];華東理工大學(xué);2013年

4 曹柳;褐藻膠的提取純化、氧化降解及體外活性研究[D];山東大學(xué);2015年

5 郭恩文;海洋弧菌QY104的褐藻膠裂解酶AlyV4的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2013年

6 吳信;多肋藻（Costaria costata）的營(yíng)養(yǎng)成分及多糖結(jié)構(gòu)和性質(zhì)研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2015年

7 羅丹丹;產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌種篩選與酶學(xué)性質(zhì)研究[D];大連工業(yè)大學(xué);2016年

8 端木慶國(guó);褐藻膠裂解酶產(chǎn)生菌的鑒定及產(chǎn)酶固定化研究[D];大連工業(yè)大學(xué);2016年

9 孫麗萍;銹凹螺褐藻膠裂解酶的酶學(xué)特性及褐藻膠寡糖的活性研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2004年

10 劉玉佩;芽孢桿菌褐藻膠裂解酶的實(shí)驗(yàn)室制備及其基因克隆與表達(dá)的研究[D];上海海洋大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2446283