【摘要】：【目的】克隆小菜蛾表皮蛋白基因(Plutella xylostella cuticular protein,PxyICP),分析其序列特征和發(fā)育表達(dá)模式,為深入研究PxyICP在小菜蛾表皮形成中的生理功能提供科學(xué)參考。【方法】以小菜蛾為試驗(yàn)材料,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和快速擴(kuò)增c DNA末端(RACE)技術(shù)克隆PxyICP,以生物信息學(xué)方法對(duì)其序列特征進(jìn)行分析,并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究PxyICP m RNA在小菜蛾不同發(fā)育時(shí)期中的相對(duì)表達(dá)量。【結(jié)果】克隆獲得的PxyICP基因開放閱讀框長(zhǎng)531 bp,編碼177個(gè)氨基酸,相對(duì)分子質(zhì)量約18.90 k D,等電點(diǎn)為5.32。氨基酸序列分析結(jié)果表明,小菜蛾表皮蛋白第1~16位氨基酸是參與跨膜蛋白轉(zhuǎn)移的信號(hào)肽,且該序列具有昆蟲表皮蛋白CPR家族中RR-1型保守基序的典型特征。不同發(fā)育時(shí)期的實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析結(jié)果表明,PxyICP在小菜蛾各發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量不同,其中PxyICP在2、3和4齡幼蟲、蛹和成蟲中的表達(dá)量分別是1齡幼蟲的2.43、0.51、0.63、3.19和12.32倍,以在成蟲的表達(dá)量最高。【結(jié)論】成功克隆獲得PxyICP基因,根據(jù)其發(fā)育表達(dá)模式推測(cè)PxyICP蛋白參與小菜蛾成蟲表皮的硬化和黑化等生理過(guò)程。
[Abstract]:[objective] to clone the epidermal protein gene (Plutella xylostella cuticular protein,PxyICP) of Plutella xylostella and analyze its sequence characteristics and developmental expression pattern. In order to study the physiological function of PxyICP in the epidermis formation of diamondback moth (Plutella xylostella), the PxyICP, was cloned by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and rapid amplification of c DNA terminal (RACE). The sequence characteristics were analyzed by bioinformatics, and the relative expression of PxyICP m RNA in diamondback moth (Plutella xylostella) at different developmental stages was studied by real-time fluorescence quantitative PCR. [results] the length of open reading frame of PxyICP gene cloned was 531 bp,. It encodes 177 amino acids with relative molecular weight of 18.90 KD and isoelectric point of 5.32. The results of amino acid sequence analysis showed that the amino acid at position 1 ~ (16) of Plutella xylostella epidermis protein was a signal peptide involved in transmembrane protein transfer, and it had the typical characteristics of conserved motif of RR-1 type in CPR family of insect epidermal protein. The results of real-time fluorescence quantitative PCR analysis at different developmental stages showed that the expression of PxyICP was different in different developmental stages of Plutella xylostella, in which PxyICP was found in the 3rd and 4th instar larvae of Plutella xylostella. The expression levels in pupae and adult were 3.19 and 12.32 times of that of the first instar larva, respectively. [conclusion] the PxyICP gene was cloned successfully. According to its developmental expression pattern, PxyICP protein is involved in the physiological process of epidermis sclerosis and melanization of Plutella xylostella (Plutella xylostella).
【作者單位】： 仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(31401805) 廣東省高等學(xué)校優(yōu)秀青年教師培養(yǎng)項(xiàng)目(KA1548850)
【分類號(hào)】：S433.4

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本文編號(hào)：2427799