【摘要】：目的研究用慢病毒載體法建立乳腺癌α2,3-唾液酸轉移酶ST3GalⅢ基因RNA干擾(RNAi)的細胞模型。方法針對ST3GalⅢ基因設計4組短發(fā)夾RNA序列,合成DNA與線性化的pGLV3-H1-GFP載體連接,構建慢病毒載體質(zhì)粒。鑒定后,進行病毒包裝和病毒滴度檢測;將獲得的重組慢病毒pGLV3-H1-GFP-shST3轉染人乳腺癌MDA-MB-231細胞后,將轉染細胞分為3組:空白組,未轉染組(mock cells,M);對照組(轉染對照慢病毒,parent cells,P);干擾組,轉染慢病毒載體pGLV5-H1-GFP-shST3(shST3-1,2,3,4)。以熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達,經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選;用實時定量PCR、Western blot檢測轉染后MDA-MB-231細胞中ST3Gal Ⅲ mRNA及蛋白表達,以流式細胞術分析細胞表面α2,3-唾液酸水平。結果成功構建針對ST3GalⅢ基因的RNAi慢病毒載體,病毒懸液滴度均2×10~8TU·mL~(-1)。各轉染細胞的轉染效率達90%以上;經(jīng)嘌呤霉素篩選后,干擾組的ST3Gal Ⅲ mRNA的抑制率分別為42.1%,66.7%,30.1%,80.9%及蛋白表達水平分別下降了35.92%,75.64%,37.12%,81.75%。與對照組比較,干擾組細胞ST3Gal Ⅲ基因的mRNA及蛋白表達顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);shST3-4組細胞表面α2,3-唾液酸水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論成功構建了乳腺癌ST3Gal Ⅲ基因RNAi的細胞模型shST3-4。
[Abstract]:Objective to establish a human breast cancer cell model in which RNA of 偽 _ 2 and 3-sialic acid transferase ST3Gal 鈪，

本文編號：2427721