【摘要】：目的:探討沉默受體相互作用蛋白激酶4(receptor interacting protein kinase4,RIPK 4)基因表達對增強腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)誘導骨肉瘤MG-63細胞凋亡的影響。方法:采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將特異性針對RIPK 4基因的siRNA轉(zhuǎn)入骨肉瘤MG-63細胞(RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組),以轉(zhuǎn)染陰性對照-siRNA(negative control-siRNA,NC-siRNA)作為陰性對照組,同時設(shè)僅用人重組TNF-α處理MG-63細胞的陽性對照組以及RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染MG-63細胞后再行TNF-α處理組。5-乙炔基-2’-脫氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)法檢測MG-63細胞的增殖情況;Hoechst 33258染色法檢測MG-63細胞的凋亡情況;蛋白質(zhì)印跡法檢測骨肉瘤MG-63細胞RIPK4蛋白及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-xL和caspase-3的表達情況。結(jié)果:RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染MG-63細胞后,RIPK4蛋白的表達水平明顯下調(diào)(P0.05)。RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組、NC-siRNA轉(zhuǎn)染組、TNF-α陽性對照組和RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染+TNF-α組細胞的EdU陽性表達率分別為60.7%、39.6%、43.3%和16.7%,RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組細胞的增殖能力較NC-siRNA轉(zhuǎn)染組明顯降低(P0.05),RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染+TNF-α組細胞的增殖能力較RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組和TNF-α陽性對照組明顯降低(P值均0.05)。RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組發(fā)生凋亡的細胞數(shù)較NC-siRNA轉(zhuǎn)染組增多(P0.05),RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組+TNF-α組發(fā)生凋亡的細胞數(shù)較RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組和TNF-α陽性對照組明顯增多(P值均0.05)。與NC-siRNA轉(zhuǎn)染組相比,RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組中Bax和caspase-3蛋白的表達水平均明顯上調(diào),而Bcl-xL蛋白的表達水平下調(diào),差異均有統(tǒng)計學意義(P值均0.05);RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組+TNF-α組中Bax和caspase-3蛋白表達水平均較RIPK4-siRNA轉(zhuǎn)染組和TNF-α陽性對照組明顯上調(diào),而Bcl-xL蛋白的表達水平進一步下調(diào),差異均具有統(tǒng)計學意義(P值均0.05)。結(jié)論:沉默RIPK 4基因表達可誘導骨肉瘤MG-63細胞發(fā)生凋亡,并且可以增強TNF-α誘導的細胞凋亡的敏感性。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of silencing receptor interacting protein kinase 4 (receptor interacting protein kinase4,RIPK 4) gene expression on the apoptosis of osteosarcoma MG-63 cells induced by tumor necrosis factor 偽 (tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽). Methods: siRNA specific for RIPK 4 gene was transfected into MG-63 cells of osteosarcoma (RIPK4-siRNA transfection group) by liposome transfection, and negative control group (siRNA (negative control-siRNA,NC-siRNA) was used as negative control group. At the same time, the MG-63 cells were treated with human recombinant TNF- 偽 only as the positive control group, and the RIPK4-siRNA transfected MG-63 cells were treated with TNF- 偽. 5-ethynyl-2oxy-deoxyuridine, 5-ethynyl-2- deoxyuridine, were treated with 5-ethynyl-2- deoxyuridine, and then treated with TNF- 偽. EdU) method was used to detect the proliferation of MG-63 cells. The apoptosis of MG-63 cells was detected by Hoechst 33258 staining and the expression of RIPK4 protein and apoptosis-related proteins Bax,Bcl-xL and caspase-3 in MG-63 cells of osteosarcoma were detected by Western blot. Results: after RIPK4-siRNA was transfected into MG-63 cells, the expression of RIPK4 protein was significantly down-regulated (P0.05). RIPK4-siRNA transfection group, NC-siRNA transfection group, the expression level of RIPK4 protein decreased significantly (P0.05). The positive expression rates of EdU in TNF- 偽 positive control group and RIPK4-siRNA transfected TNF- 偽 group were 60.763% and 16.7%, respectively. The proliferation ability of RIPK4-siRNA transfected group was significantly lower than that of NC-siRNA transfection group (P0.05). The proliferation ability of TNF- 偽 cells transfected with RIPK4-siRNA was significantly lower than that of RIPK4-siRNA transfection group and TNF- 偽 positive control group (P < 0. 05). The number of apoptotic cells in RIPK4-siRNA transfection group was higher than that in NC-siRNA transfection group (P0.05). The number of apoptotic cells in TNF- 偽 group in RIPK4-siRNA transfection group was significantly higher than that in RIPK4-siRNA transfection group and TNF- 偽 positive control group (P < 0. 05). Compared with the NC-siRNA transfection group, the expression of Bax and caspase-3 protein in the RIPK4-siRNA transfection group was significantly up-regulated, while the expression level of Bcl-xL protein was down-regulated (P < 0. 05). The expression levels of Bax and caspase-3 protein in TNF- 偽 group of RIPK4-siRNA transfection group were significantly higher than those in RIPK4-siRNA transfection group and TNF- 偽 positive control group, while the expression of Bcl-xL protein was further down-regulated. The difference was statistically significant (P 0.05). Conclusion: silencing the expression of RIPK 4 gene can induce apoptosis in MG-63 cells of osteosarcoma and enhance the sensitivity of apoptosis induced by TNF- 偽.
【作者單位】： 蘭州大學第二醫(yī)院骨科;武威市人民醫(yī)院骨科;蘭州大學第二醫(yī)院風濕免疫科;甘肅省腫瘤醫(yī)院骨與軟組織腫瘤科;
【基金】：甘肅省基礎(chǔ)研究創(chuàng)新群體項目(編號:1308RJIA004)~~
【分類號】：R738.1

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9 朱U，

本文編號：2365881