【摘要】：為了解臨床禽源致病性大腸桿菌中高致病性毒力島(High pathogenicity island HPI)流行情況和基因特征,根據(jù)Gen Bank已知禽源irp2基因序列,設計、合成一對特異性引物,建立irp2基因PCR檢測方法,優(yōu)化、確定PCR擴增特性,進行敏感性、特異性、重復性檢測評價。對256份臨床分離禽源大腸桿菌進行irp2基因PCR檢測和基因遺傳變異分析。結果顯示,建立的PCR檢測方法敏感性可達2.14×10~(-4)ng/μL;特異性顯示與雞沙門菌、副雞嗜血桿菌、鴨疫里默菌、禽巴氏桿菌、雞毒支原體、雞新城疫病毒、禽流感病毒(H9N5)核酸均無交叉反應;重復性顯示3份陽性樣品重復5次檢測,變異系數(shù)3.4%~5.0%。256份臨床樣品PCR檢測irp2基因,陽性率30.6%。獲得了9株分離株irp2基因序列,分析顯示,與GenBank已知基因同源性高達96.2%以上。說明建立的禽源大腸桿菌HPI毒力島irp2基因PCR檢測方法具有良好的特異性、敏感性和重復性,可應用于臨床致病性大腸桿菌毒力島基因快速檢測。
[Abstract]:In order to understand the prevalence and gene characteristics of high virulence island (High pathogenicity island HPI) in clinical avian pathogenic Escherichia coli, a pair of specific primers were designed and synthesized according to the known irp2 gene sequence of Gen Bank, and a method for detection of irp2 gene PCR was established. To optimize and determine the characteristics of PCR amplification, to evaluate sensitivity, specificity and repeatability. Irp2 gene PCR and genetic variation analysis were performed in 256 clinical isolates of avian Escherichia coli. The results showed that the sensitivity of the established PCR assay was 2.14 脳 10 ~ (-4) ng/ 渭 L. There was no cross reaction with Salmonella, Haemophilus paraequis, Riemer Duck, Pasteurella, Mycoplasma, Newcastle disease virus and H9N5 nucleic acid. The reproducibility showed that 3 positive samples were repeated for 5 times, and the coefficient of variation was 3.45.00.256 clinical samples were tested for irp2 gene by PCR. The positive rate was 30.6%. The sequence of irp2 gene of 9 isolates was obtained, and the analysis showed that the homology of the known gene with GenBank was above 96.2%. The results showed that the established PCR method for detection of virulence island irp2 gene of avian Escherichia coli had good specificity, sensitivity and reproducibility, and could be used for rapid detection of virulence island gene in clinical pathogenic Escherichia coli.
【作者單位】： 山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院;山東省濱州畜禽蜂膠疫苗研究開發(fā)推廣中心;山東綠都安特動物藥業(yè)有限公司;
【基金】：山東省自然科學基金資助項目(ZR2014CQ012)
【分類號】：S852.612

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2365749