【摘要】：為了解臨床禽源致病性大腸桿菌中高致病性毒力島(High pathogenicity island HPI)流行情況和基因特征,根據(jù)Gen Bank已知禽源irp2基因序列,設(shè)計(jì)、合成一對(duì)特異性引物,建立irp2基因PCR檢測(cè)方法,優(yōu)化、確定PCR擴(kuò)增特性,進(jìn)行敏感性、特異性、重復(fù)性檢測(cè)評(píng)價(jià)。對(duì)256份臨床分離禽源大腸桿菌進(jìn)行irp2基因PCR檢測(cè)和基因遺傳變異分析。結(jié)果顯示,建立的PCR檢測(cè)方法敏感性可達(dá)2.14×10~(-4)ng/μL;特異性顯示與雞沙門(mén)菌、副雞嗜血桿菌、鴨疫里默菌、禽巴氏桿菌、雞毒支原體、雞新城疫病毒、禽流感病毒(H9N5)核酸均無(wú)交叉反應(yīng);重復(fù)性顯示3份陽(yáng)性樣品重復(fù)5次檢測(cè),變異系數(shù)3.4%~5.0%。256份臨床樣品PCR檢測(cè)irp2基因,陽(yáng)性率30.6%。獲得了9株分離株irp2基因序列,分析顯示,與GenBank已知基因同源性高達(dá)96.2%以上。說(shuō)明建立的禽源大腸桿菌HPI毒力島irp2基因PCR檢測(cè)方法具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性,可應(yīng)用于臨床致病性大腸桿菌毒力島基因快速檢測(cè)。
[Abstract]:In order to understand the prevalence and gene characteristics of high virulence island (High pathogenicity island HPI) in clinical avian pathogenic Escherichia coli, a pair of specific primers were designed and synthesized according to the known irp2 gene sequence of Gen Bank, and a method for detection of irp2 gene PCR was established. To optimize and determine the characteristics of PCR amplification, to evaluate sensitivity, specificity and repeatability. Irp2 gene PCR and genetic variation analysis were performed in 256 clinical isolates of avian Escherichia coli. The results showed that the sensitivity of the established PCR assay was 2.14 脳 10 ~ (-4) ng/ 渭 L. There was no cross reaction with Salmonella, Haemophilus paraequis, Riemer Duck, Pasteurella, Mycoplasma, Newcastle disease virus and H9N5 nucleic acid. The reproducibility showed that 3 positive samples were repeated for 5 times, and the coefficient of variation was 3.45.00.256 clinical samples were tested for irp2 gene by PCR. The positive rate was 30.6%. The sequence of irp2 gene of 9 isolates was obtained, and the analysis showed that the homology of the known gene with GenBank was above 96.2%. The results showed that the established PCR method for detection of virulence island irp2 gene of avian Escherichia coli had good specificity, sensitivity and reproducibility, and could be used for rapid detection of virulence island gene in clinical pathogenic Escherichia coli.
【作者單位】： 山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院;山東省濱州畜禽蜂膠疫苗研究開(kāi)發(fā)推廣中心;山東綠都安特動(dòng)物藥業(yè)有限公司;
【基金】：山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(ZR2014CQ012)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.612

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 陳偉;張永正;汪雪雁;薛秀恒;涂健;祁克宗;;動(dòng)物源性大腸桿菌ESBLs類(lèi)耐藥基因與HPI基因的雙重PCR檢測(cè)及相關(guān)性分析[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2013年08期

2 許麗;祁克宗;彭開(kāi)松;;禽致病性大腸桿菌(CVCC1565)中耶爾森菌強(qiáng)毒力島核心區(qū)的檢測(cè)[J];生物學(xué)雜志;2010年06期

3 張冬梅,俞守義,唐根富;中國(guó)腸產(chǎn)毒性大腸桿菌中耶爾森菌強(qiáng)毒力島的檢測(cè)[J];中國(guó)人獸共患病雜志;2003年01期

4 程伯鯤,葉長(zhǎng)蕓,伍建宏,孫暉,趙斌秀,徐建國(guó);腸產(chǎn)志賀樣毒素的大腸桿菌菌株中小腸結(jié)腸炎耶爾森菌毒力島基因irp-2的檢測(cè)[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2000年06期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王艷萍;董林;郭時(shí)金;徐倩倩;莫玲;王金良;劉吉山;沈志強(qiáng);;禽源性大腸桿菌HPI毒力島irp2基因PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2017年01期

2 汪凱;王琦;潘玲;劉紅梅;周杰;;禽大腸桿菌毒力島主要攝鐵基因及生物膜的檢測(cè)[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2016年01期

3 李葉芳;白灝;彭開(kāi)松;涂健;祁克宗;;禽致病性大腸桿菌強(qiáng)毒力島攝鐵功能與致病性關(guān)系的研究[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2012年09期

4 許麗;祁克宗;彭開(kāi)松;;禽致病性大腸桿菌(CVCC1565)中耶爾森菌強(qiáng)毒力島核心區(qū)的檢測(cè)[J];生物學(xué)雜志;2010年06期

5 張冬梅;王斌;;三種細(xì)菌HPI核心區(qū)ybtE基因核苷酸序列及推導(dǎo)氨基酸序列的比較研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年03期

6 胡永軒;歐陽(yáng)丹明;余曉芬;李木蘭;劉巧突;何志雄;;致病性大腸埃希菌高致病性毒力島irp2基因序列的擴(kuò)增與分析[J];中國(guó)感染控制雜志;2008年03期

7 于學(xué)輝;程安春;汪銘書(shū);王英;王遠(yuǎn)微;湯承;;鴨源致病性大腸桿菌的血清型鑒定及其相關(guān)毒力基因分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2008年01期

8 于學(xué)輝;王英;王遠(yuǎn)微;湯承;楊曉農(nóng);程安春;;鴨致病性大腸桿菌中耶爾森菌強(qiáng)毒力島的分子流行病學(xué)調(diào)查[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年06期

9 金文杰;鄭志明;秦愛(ài)建;劉岳龍;邵紅霞;張永志;黃訓(xùn)良;;禽致病性大腸桿菌中耶爾森菌強(qiáng)毒力島的分子流行病學(xué)調(diào)查[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2006年10期

10 金文杰,鄭志明,王倩倩,秦愛(ài)建,劉岳龍,邵紅霞;禽源性大腸桿菌HPI irp2基因序列的擴(kuò)增及比較[J];揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào);2005年03期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李葉芳;白灝;彭開(kāi)松;涂健;祁克宗;;禽致病性大腸桿菌強(qiáng)毒力島攝鐵功能與致病性關(guān)系的研究[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2012年09期

2 張艷英;史秋梅;房海;陳翠珍;劉亞君;楊月琳;;腹瀉仔貉檢出攜帶耶爾森菌HPI毒力島的大腸桿菌[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2012年02期

3 張海峰;彭開(kāi)松;涂健;祁克宗;;禽致病性大腸埃希菌強(qiáng)毒力島(HPI)全島缺失株的構(gòu)建[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2011年08期

4 薛原;陳建飛;張秀英;華育平;趙樹(shù)臣;;雞源大腸桿菌ESBLs基因型檢測(cè)及其耐藥性分析[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2011年04期

5 吐?tīng)柡椤づ瑺?王世民;蘇艷;;新疆奶牛乳源大腸桿菌Irp2毒力島的克隆及序列分析[J];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年06期

6 呂殿紅;胡奇林;周秀蓉;孫敏華;董嘉文;;廣東省發(fā)病豬禽大腸桿菌中耶爾森菌強(qiáng)毒力島的分布[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2010年07期

7 王春紅;梁巍;薛愛(ài)芳;蔡鵬;榮興民;黃巧云;;獸藥抗生素在土壤中行為的研究進(jìn)展[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

8 苑麗;劉建華;胡功政;劉智明;莫娟;潘玉善;康宇;魏永俊;;30株雞大腸桿菌ESBLs基因型檢測(cè)及耐藥性分析[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年06期

9 胡永軒;歐陽(yáng)丹明;余曉芬;李木蘭;劉巧突;何志雄;;致病性大腸埃希菌高致病性毒力島irp2基因序列的擴(kuò)增與分析[J];中國(guó)感染控制雜志;2008年03期

10 湯景元;王紅寧;張鵬舉;Q面，

本文編號(hào)：2365749