【摘要】：為了建立百合斑駁病毒(Lily mottle virus,LMoV)的快速檢測方法,采用RT-PCR方法從感染LMoV的百合葉片中克隆該病毒的外殼蛋白(coat protein,CP)基因,然后連接到原核表達(dá)載體pET28a(+)上,導(dǎo)入大腸桿菌Escherichia coliBL21(DE3)并誘導(dǎo)表達(dá),以表達(dá)的重組蛋白為抗原制備該病毒的抗血清。結(jié)果顯示:LMoVCP全長為822 bp,編碼274個(gè)氨基酸;SDS-PAGE及Western blot檢測結(jié)果表明,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)得到了分子量約為34 kD帶有HIS標(biāo)簽的目的蛋白;用該蛋白制備的抗血清經(jīng)間接ELISA和Western blot檢測結(jié)果顯示,其效價(jià)為1∶51 200,具有較高的特異性,可用于感染LMoV百合的檢測,其檢測結(jié)果與RT-PCR檢測結(jié)果一致。
[Abstract]:In order to establish a rapid detection method for lily mottle virus (Lily mottle virus,LMoV), the coat protein (coat protein,CP) gene of lily mottle virus (lily) was cloned from the leaves of lily infected with LMoV by RT-PCR method. Then the recombinant protein was ligated to the prokaryotic expression vector pET28a () and introduced into Escherichia coli Escherichia coliBL21 (DE3). The recombinant protein was used as antigen to prepare the antiserum of the virus. The results showed that the total length of LMoVCP was 822 bp, encoding 274 amino acids, and the results of SDS-PAGE and Western blot showed that the target protein with a molecular weight of 34 kD with HIS tag was obtained by IPTG induction. The results of indirect ELISA and Western blot detection showed that the antiserum prepared with this protein had a high specificity and could be used to detect the infection of LMoV lily. The results were consistent with that of RT-PCR.
【作者單位】： 大連理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;大連理工大學(xué)生命與醫(yī)藥學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31070621)
【分類號】：S436.8

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本文編號：2351344