【摘要】：實時定量PCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于植物功能基因轉(zhuǎn)錄水平變化的研究,選擇適當(dāng)?shù)膬?nèi)參基因是獲得準(zhǔn)確分析結(jié)果的關(guān)鍵。氮元素的吸收和利用是影響高粱(Sorghum bicolor)產(chǎn)量的重要決定因素。本研究選取7個常用內(nèi)參基因肌動蛋白基因(Actin)、多聚泛素酶基因(ubiqutin conjugating enzyme,UBQ)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因(glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、UBQ10、真核生物翻譯起始因子2B(eukaryotic translation initiation factor 2B,EIF2B)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因家族(glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase,sb GAPDH)和真核生物翻譯起始因子4a(eukaryotic translation initiation factor 4a,EIF4a)作為候選內(nèi)參基因,以高粱根和葉為材料,篩選低氮脅迫下高粱實時熒光定量PCR(qRT-PCR)實驗體系的最佳內(nèi)參基因。經(jīng)引物特異性檢測,各候選內(nèi)參基因引物均符合穩(wěn)定性篩選要求。熒光定量PCR分析結(jié)果表明,7個候選內(nèi)參基因的表達(dá)水平和穩(wěn)定性因組織和氮處理的不同而呈現(xiàn)差異。葉片中GAPDH較其他內(nèi)參基因表達(dá)豐度高;而在根系中UBQ10表達(dá)豐度最高。應(yīng)用GeNorm軟件程序?qū)蜻x內(nèi)參基因穩(wěn)定性進(jìn)行評價。結(jié)果表明,內(nèi)參基因GAPDH和EIF4a在葉片中的表達(dá)穩(wěn)定性最高,而根系中表達(dá)穩(wěn)定度最高的為sbGAPDH和EIF4a。本研究結(jié)果為高粱中低氮脅迫相關(guān)差異基因的表達(dá)分析提供了基礎(chǔ)資料,同時可為其他作物的同類研究提供參考。
[Abstract]:Real-time quantitative PCR is widely used to study the transcriptional changes of plant functional genes. The key to obtain accurate analysis results is to select appropriate internal reference genes. The absorption and utilization of nitrogen is an important determinant of sorghum (Sorghum bicolor) yield. In this study, seven common domestic reference genes, actin gene (Actin), polyubiquitin gene (ubiqutin conjugating enzyme,UBQ, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase gene (glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH), UBQ10, eukaryotic translation initiation factor 2B (eukaryotic translation initiation factor 2BF2B, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase geneticizer, were selected. Family (glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase,sb GAPDH) and eukaryote translation initiation factor 4a (eukaryotic translation initiation factor 4aEIF4a were used as candidate internal reference genes. Using sorghum roots and leaves as materials, the best internal reference genes of real-time fluorescence quantitative PCR (qRT-PCR) system for sorghum under low nitrogen stress were screened. The results of primer specificity showed that the primers of each candidate internal reference gene met the requirements of stability screening. The results of fluorescence quantitative PCR analysis showed that the expression level and stability of the seven candidate internal reference genes were different with different tissues and nitrogen treatments. The expression abundance of GAPDH in leaves was higher than that of other reference genes, but the abundance of UBQ10 in roots was the highest. The stability of candidate internal reference gene was evaluated by GeNorm software. The results showed that the stability of GAPDH and EIF4a expression in leaves was the highest, while the stability of sbGAPDH and EIF4a. in root system was the highest. The results of this study provide basic data for the analysis of differentially expressed genes related to low nitrogen stress in sorghum, and can be used as a reference for the similar studies of other crops.
【作者單位】： 山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心;農(nóng)業(yè)部黃土高原作物基因資源創(chuàng)制重點實驗室;晉中學(xué)院;山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【基金】：山西省財政支農(nóng)項目(No.2015TGSF-10) 山西省科技攻關(guān)項目(No.20140311003-4)
【分類號】：S514

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本文編號：2292687