【摘要】：大豆異黃酮是苯丙氨酸代謝途徑中合成的一類(lèi)次級(jí)代謝產(chǎn)物,在苯丙氨酸代謝途徑中,苯丙氨酸解氨酶(PAL)是關(guān)鍵酶和限速酶。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)PAL基因的相對(duì)表達(dá)量與大豆異黃酮含量具有明顯的協(xié)同增減趨勢(shì),并且在PAL基因家族成員時(shí)空表達(dá)模式分析中發(fā)現(xiàn),PAL2-3(XM_003542493)是PAL基因家族中相對(duì)表達(dá)量較高的主要表達(dá)成員之一。本試驗(yàn)首先通過(guò)克隆大豆中PAL2-3基因;然后構(gòu)建pCAMBIA3301-GmPAL2-3植物過(guò)表達(dá)載體,將構(gòu)建好的pCAMBIA3301-GmPAL2-3表達(dá)載體重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌EHA105中;采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化體系獲得轉(zhuǎn)化植株,并對(duì)T1代轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行PPT檢測(cè),外源標(biāo)記基因Bar檢測(cè)以及熒光定量PCR檢測(cè),對(duì)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株進(jìn)行大豆籽粒異黃酮含量的測(cè)定。結(jié)果表明T_1代轉(zhuǎn)基因植株中PAL2-3基因的表達(dá)量是對(duì)照的5.11~11.24倍,總異黃酮含量最高的(2 587.63μg·g~(-1))是對(duì)照(1 616.90μg·g~(-1))的1.6倍。因此在大豆中過(guò)量表達(dá)PAL2-3基因可以提高大豆籽粒中異黃酮含量。
[Abstract]:Soybean isoflavones are a kind of secondary metabolites in phenylalanine metabolic pathway. In phenylalanine metabolic pathway, phenylalanine ammonia lyase (PAL) is the key enzyme and rate-limiting enzyme. The previous study of our group found that the relative expression of PAL gene and soybean isoflavone content have obvious synergistic increasing or decreasing trend. It is found that PAL2-3 (XM_003542493) is one of the most important members of PAL gene family. In this experiment, PAL2-3 gene was cloned from soybean, then pCAMBIA3301-GmPAL2-3 plant overexpression vector was constructed, and the recombinant plasmid of pCAMBIA3301-GmPAL2-3 expression vector was transformed into Agrobacterium tumefaciens EHA105. The transformed plants were obtained by Agrobacterium tumefaciens mediated transformation system of soybean cotyledon. The transformed plants were detected by PPT, Bar and fluorescence quantitative PCR. The contents of isoflavones in soybean seeds were determined by transgenic positive plants. The results showed that the expression of PAL2-3 gene in T _ 1 transgenic plants was 11.24 times of that of the control, and the highest total isoflavone content (2 587.63 渭 g g ~ (-1) was 1.6-fold higher than that of the control (1 616.90 渭 g g ~ (-1). Therefore, overexpression of PAL2-3 gene in soybean could increase the content of isoflavones in soybean grains.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31101168) 黑龍江省科技廳國(guó)際科技合作項(xiàng)目(WC05B10)
【分類(lèi)號(hào)】：S565.1

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本文編號(hào)：2292677