【摘要】：大豆異黃酮是苯丙氨酸代謝途徑中合成的一類次級代謝產(chǎn)物,在苯丙氨酸代謝途徑中,苯丙氨酸解氨酶(PAL)是關(guān)鍵酶和限速酶。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)PAL基因的相對表達量與大豆異黃酮含量具有明顯的協(xié)同增減趨勢,并且在PAL基因家族成員時空表達模式分析中發(fā)現(xiàn),PAL2-3(XM_003542493)是PAL基因家族中相對表達量較高的主要表達成員之一。本試驗首先通過克隆大豆中PAL2-3基因;然后構(gòu)建pCAMBIA3301-GmPAL2-3植物過表達載體,將構(gòu)建好的pCAMBIA3301-GmPAL2-3表達載體重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌EHA105中;采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化體系獲得轉(zhuǎn)化植株,并對T1代轉(zhuǎn)化植株進行PPT檢測,外源標記基因Bar檢測以及熒光定量PCR檢測,對轉(zhuǎn)基因陽性植株進行大豆籽粒異黃酮含量的測定。結(jié)果表明T_1代轉(zhuǎn)基因植株中PAL2-3基因的表達量是對照的5.11~11.24倍,總異黃酮含量最高的(2 587.63μg·g~(-1))是對照(1 616.90μg·g~(-1))的1.6倍。因此在大豆中過量表達PAL2-3基因可以提高大豆籽粒中異黃酮含量。
[Abstract]:Soybean isoflavones are a kind of secondary metabolites in phenylalanine metabolic pathway. In phenylalanine metabolic pathway, phenylalanine ammonia lyase (PAL) is the key enzyme and rate-limiting enzyme. The previous study of our group found that the relative expression of PAL gene and soybean isoflavone content have obvious synergistic increasing or decreasing trend. It is found that PAL2-3 (XM_003542493) is one of the most important members of PAL gene family. In this experiment, PAL2-3 gene was cloned from soybean, then pCAMBIA3301-GmPAL2-3 plant overexpression vector was constructed, and the recombinant plasmid of pCAMBIA3301-GmPAL2-3 expression vector was transformed into Agrobacterium tumefaciens EHA105. The transformed plants were obtained by Agrobacterium tumefaciens mediated transformation system of soybean cotyledon. The transformed plants were detected by PPT, Bar and fluorescence quantitative PCR. The contents of isoflavones in soybean seeds were determined by transgenic positive plants. The results showed that the expression of PAL2-3 gene in T _ 1 transgenic plants was 11.24 times of that of the control, and the highest total isoflavone content (2 587.63 渭 g g ~ (-1) was 1.6-fold higher than that of the control (1 616.90 渭 g g ~ (-1). Therefore, overexpression of PAL2-3 gene in soybean could increase the content of isoflavones in soybean grains.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31101168) 黑龍江省科技廳國際科技合作項目(WC05B10)
【分類號】：S565.1

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2292677