【摘要】：本實(shí)驗(yàn)旨在研究RNA干擾(RNAi)RACK1基因?qū)2C12成肌細(xì)胞中肌分化標(biāo)志基因MHC和MyoG表達(dá)的影響。將人工合成的靶向RAKC1基因的3條si RNA(1,2,3)轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞,用RT-qPCR方法檢測并篩選干擾效率最高的1條siRNA。將篩選出的si RNA轉(zhuǎn)染C2C12成肌細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞分化,通過RT-qPCR、Western blot和免疫熒光方法在mRNA及蛋白水平檢測RACK1基因沉默后對(duì)MHC和MyoG表達(dá)的影響。此外,Western blot方法檢測RACK1基因沉默后對(duì)PI3K/Akt和Erk/MAPK通路激活的影響。結(jié)果表明:RACK1-si RNA-2干擾效率最高,轉(zhuǎn)染48 h后抑制率可達(dá)70%。隨后,C2C12細(xì)胞轉(zhuǎn)染si RNA-2,誘導(dǎo)分化48h后RTqPCR表明,MHC和MyoG的m RNA表達(dá)均顯著性下調(diào)(P0.05);誘導(dǎo)分化72 h后,Western blot和免疫熒光結(jié)果表明MHC和MyoG的蛋白表達(dá)明顯低于對(duì)照組,但AKT和Erk磷酸化水平未見明顯變化。上述結(jié)果表明,干擾RACK1能顯著抑制MHC和MyoG的表達(dá),提示RACK1正向調(diào)控C2C12成肌細(xì)胞的分化。
[Abstract]:The purpose of this study was to investigate the effect of RNA interference of (RNAi) RACK1 gene on the expression of MHC and MyoG in C2C12 myoblasts. C2C12 cells were transfected with three synthetic si RNA (1 / 2 gene targeting RAKC1 gene. RT-qPCR method was used to detect and screen one siRNA. with the highest interference efficiency. The selected si RNA was transfected into C2C12 myoblasts and induced to differentiate. The effect of RACK1 gene silencing on the expression of MHC and MyoG was detected by RT-qPCR,Western blot and immunofluorescence at the mRNA and protein levels. In addition, the effect of RACK1 gene silencing on the activation of PI3K/Akt and Erk/MAPK pathway was detected by, Western blot method. The results showed that the interference efficiency of RACK1-si RNA-2 was the highest, and the inhibition rate reached 70% after 48 h transfection. Subsequently, the expression of m RNA in MHC and MyoG was significantly down-regulated in C2C12 cells transfected with si RNA-2, for 48 h (P0.05), and the expression of MHC and MyoG protein was significantly lower than that in control group 72 h after differentiation (P0.05). However, the phosphorylation levels of AKT and Erk did not change significantly. These results suggest that interfering with RACK1 can significantly inhibit the expression of MHC and MyoG, suggesting that RACK1 positively regulates the differentiation of C2C12 myoblasts.
【作者單位】： 武漢輕工大學(xué)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：湖北省自然科學(xué)資助項(xiàng)目(2015CFB514) 湖北省高等學(xué)校優(yōu)秀中青年科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)計(jì)劃項(xiàng)目(T201508)
【分類號(hào)】：Q78

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