【摘要】：為研究TGF-β1/Smad4信號通路在草魚(Ctenopharyngodon idellus)肌肉發(fā)育過程中的作用機制,首先克隆了草魚TGF-β1、Smad4基因開放閱讀框(ORF,Open reading frame)序列各1 134和1 644bp。其次,在TGF-β1、Smad4序列兩端分別加上相應的酶切位點,同時對pcDNA3.1(+)真核表達載體進行雙酶切,將帶酶切位點的片段正向插入到真核表達載體pcDNA3.1(+)中,構建TGF-β1、Smad4基因的真核過表達載體pcDNA3.1(+)-TGF-β1、pcDNA3.1(+)-Smad4。另一方面,根據(jù)TGF-β1、Smad4基因序列全長分別設計3對長度為48bp的shRNA,然后將構建好的shRNA插入到載體pRNA-U6.1/Neo中,即可成功構建TGF-β1、Smad4基因的RNA干擾表達載體pRNA-U6.1/Neo-TGF-β1和pRNA-U6.1/Neo-Smad4。
[Abstract]:In order to study the mechanism of TGF- 尾 1/Smad4 signaling pathway in (Ctenopharyngodon idellus) muscle development of grass carp, the open reading frame (ORF,Open reading frame) sequence 1 134 and ORF,Open reading frame) sequence 1 644 BP) of TGF- 尾 1 Smad4 gene of grass carp was first cloned. Secondly, the two ends of the TGF- 尾 1 Smad4 sequence were digested with corresponding endonuclease sites, and the pcDNA3.1 () eukaryotic expression vector was digested with double enzyme, and the fragment with the restriction site was inserted into the eukaryotic expression vector pcDNA3.1 (). Construction of eukaryotic expression vector pcDNA3.1 () -TGF- 尾 _ 1npcDNA3.1 () -Smad4. for TGF- 尾 _ 1 Smad4 gene On the other hand, according to the full length of TGF- 尾 1G Smad4 gene, three pairs of 48bp shRNA, were designed and inserted into the vector pRNA-U6.1/Neo. The RNA interference expression vectors pRNA-U6.1/Neo-TGF- 尾 1 and pRNA-U6.1/Neo-Smad4. of TGF- 尾 1 and Smad4 gene were successfully constructed.
【作者單位】： 中國水產科學研究院珠江水產研究所;上海海洋大學水產與生命學院;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31402312) 國家現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系建設專項(CARS-46-17)
【分類號】：S917.4;Q78

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