【摘要】：單核細(xì)胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一種風(fēng)險(xiǎn)較高的食源性致病菌,其絕大多數(shù)毒力基因的表達(dá)均受到由prfA基因編碼的PrfA(positive regulatory factorA)蛋白全部或部分調(diào)控。使用同源重組的方法敲除Lm野生菌株EGDe的prfA基因,并通過測定生長曲線、毒力基因表達(dá)和侵襲Caco-2細(xì)胞能力等探討單缺失菌株EGDe-ΔprfA生物學(xué)特性。通過測定生長曲線顯示prfA敲除株和野生型EGDe二者生長狀態(tài)無差異;運(yùn)用實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測EGDe-ΔprfA的主要毒力基因表達(dá),結(jié)果顯示plcA、plcB毒力基因的表達(dá)量分別上升至原來的2.5倍和2倍,inlA、inlB、inlC、actA、vip等均呈下降趨勢,prfA基因表達(dá)量趨向于零;侵襲Caco-2細(xì)胞結(jié)果顯示EGDe-ΔprfA侵襲數(shù)為野生株的1/5。該基因缺失菌株的構(gòu)建及生物學(xué)特性研究對食源性致病菌EGDe致病機(jī)理研究具有重要意義并且提供了重要材料。
[Abstract]:Listeria monocytogenes (Listeria monocytogenes,Lm) is a kind of foodborne pathogenic bacteria with high risk. The expression of most virulence genes of Listeria monocytogenes (Listeria monocytogenes,Lm) is regulated in whole or in part by the PrfA (positive regulatory factorA) protein encoded by prfA gene. Homologous recombination was used to knockout the prfA gene of Lm wild strain EGDe, and the biological characteristics of single deletion strain EGDe- 螖 prfA were studied by measuring growth curve, virulence gene expression and ability of invading Caco-2 cells. The growth curve showed that there was no difference between prfA knockout and wild-type EGDe, and the expression of main virulence genes of EGDe- 螖 prfA was detected by real-time quantitative fluorescence polymerase chain reaction. The results showed that the expression of virulence gene of plcA,plcB increased to 2.5 times and 2 times of the original, inlA,inlB,inlC,actA,vip and so on showed a downward trend, prfA gene expression tended to zero, and invasion of Caco-2 cells showed that the number of EGDe- 螖 prfA invasion was 1 / 5 of that of the wild strain. The construction and biological characteristics of this gene deletion strain are of great significance for the study of pathogenic mechanism of foodborne pathogenic bacteria EGDe and provide important materials.
【作者單位】： 上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31371776) 上海市科委“科技創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃”長三角科技聯(lián)合攻關(guān)領(lǐng)域項(xiàng)目(15395810900) 上海理工大學(xué)研究生創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目;上海理工大學(xué)微創(chuàng)勵(lì)志創(chuàng)新基金項(xiàng)目
【分類號(hào)】：TS201.3

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本文編號(hào)：2263890