【摘要】：【目的】研究棉花黃萎病原菌的入侵機理。【方法】以帶有潮霉素抗性篩選基因的PUCCATPH載體以及pCAMBIA1304載體作為骨架,構(gòu)建trpc啟動子驅(qū)動的GFP-GUS基因的新疆棉花黃萎病菌表達載體1304-P-ORF,導(dǎo)入農(nóng)桿菌GV3101和AGL-1中。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)(ATMT)法分別轉(zhuǎn)入新疆棉花黃萎病原菌VD-1和VD-278中,對表達效果進行檢測�！窘Y(jié)果】篩選的潮霉素B濃度為30μg/m L,農(nóng)桿菌AGL-1對黃萎病菌的轉(zhuǎn)化效率比GV3101高40%。T0代經(jīng)含有潮霉素B的PDA培養(yǎng)基篩選,獲得了T1代轉(zhuǎn)基因大麗輪枝菌VD-12株,VD-2 784株。通過GUS組織染色,在轉(zhuǎn)基因VD-1和VD-278的菌絲和孢子中均可觀察到GUS基因的表達。對轉(zhuǎn)基因黃萎菌進行PCR分子檢測,均可檢測到GFP和潮霉素B基因。GUS-GFP和潮霉素B基因已成功轉(zhuǎn)入新疆棉花黃萎菌VD-1和VD-278中�！窘Y(jié)論】建立了新疆棉花黃萎菌的遺傳轉(zhuǎn)化體系,為進一步利用GFP-GUS基因研究新疆棉花黃萎菌對棉花侵染的過程奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to study the invasion mechanism of Verticillium wilt in cotton. [methods] PUCCATPH vector with hygromycin resistance screening gene and pCAMBIA1304 vector were used as skeleton. The expression vector 1304-P-ORF of GFP-GUS gene driven by trpc promoter was constructed and introduced into Agrobacterium tumefaciens GV3101 and AGL-1. Agrobacterium tumefaciens mediated (ATMT) was transferred into VD-1 and VD-278 of cotton Verticillium wilt in Xinjiang, respectively. [results] the concentration of hygromycin B was 30 渭 g / mL. The transformation efficiency of Agrobacterium tumefaciens AGL-1 against Verticillium wilt was higher than that of GV3101. The PDA medium containing hygromycin B was used to screen the transformation efficiency of Agrobacterium tumefaciens AGL-1 against Verticillium wilt. The T 1 transgenic VD-12 strain VD-2 784 strains were obtained. The expression of GUS gene was observed in hyphae and spores of transgenic VD-1 and VD-278 by GUS staining. GFP and hygromycin B genes. GUS-GFP and hygromycin B genes were successfully transferred into VD-1 and VD-278 of cotton wilt bacteria in Xinjiang by PCR molecular detection. [conclusion] the genetic transformation system of cotton wilt bacteria in Xinjiang was established. The results laid a foundation for the further study of cotton infection by GFP-GUS gene.
【作者單位】： 新疆石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因重大專項“轉(zhuǎn)基因棉花環(huán)境安全評價技術(shù)”(2016ZX08011)~~
【分類號】：S435.621.2

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本文編號：2213473