發(fā)布時(shí)間：2018-08-30 16:05

【摘要】：病蟲(chóng)害和土壤鹽漬化是影響煙草生長(zhǎng)發(fā)育的重要因素,轉(zhuǎn)基因技術(shù)已成為改善這一現(xiàn)狀的有效手段。本研究將部分改造的Bt基因Cry1Ac基因、Cry3A基因及NTHK1基因構(gòu)建在同一載體上,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化野生煙草植株。經(jīng)PCR檢測(cè),獲得10個(gè)轉(zhuǎn)基因株系。經(jīng)熒光定量PCR檢測(cè),Cry1Ac基因表達(dá)量在104~10~5數(shù)量級(jí),1號(hào)轉(zhuǎn)錄豐度1.58×10~5為最高,而Cry3A基因表達(dá)量在10~5~10~6數(shù)量級(jí),10號(hào)轉(zhuǎn)錄豐度1.34×10~6為最高;10個(gè)轉(zhuǎn)基因株系雙Bt基因均得到表達(dá)且存在表達(dá)差異,而對(duì)照煙草沒(méi)有Bt基因表達(dá)。經(jīng)ELISA檢測(cè),轉(zhuǎn)基因煙草Cry1Ac蛋白平均表達(dá)量為150.441 ng/g,變化在0.86~201.74 ng/g;Cry3A蛋白平均表達(dá)量為1 192.592 ng/g,變化在23.33~2413.47 ng/g。經(jīng)過(guò)對(duì)煙草斜紋夜蛾的蟲(chóng)試,初步證明轉(zhuǎn)基因植株獲得了抗蟲(chóng)性。組培苗耐鹽試驗(yàn)表明,不同鹽濃度條件下,轉(zhuǎn)基因株系的分化狀況優(yōu)于對(duì)照。證明抗蟲(chóng)耐鹽多基因的一次性轉(zhuǎn)化,可提高煙草的抗蟲(chóng)能力和耐鹽性。
[Abstract]:Insect pests and soil salinization are important factors affecting tobacco growth and development. Transgenic technology has become an effective means to improve this situation. In this study, the modified Bt gene, Cry1Ac gene, Cry3A gene and NTHK1 gene were constructed on the same vector and transformed into wild tobacco plants by Agrobacterium tumefaciens. Ten transgenic lines were obtained by PCR detection. The expression of Cry1Ac gene was detected by fluorescence quantitative PCR in the order of 10 ~ 10 ~ 10 ~ 5, 1. 58 脳 10 ~ (-1) was the highest, while the expression of Cry3A was in the order of 10 ~ 10 ~ 10 ~ (6) and 10 ~ (10) 脳 10 ~ (6). The double Bt gene of 10 transgenic lines were all expressed and expressed differently. There was no Bt gene expression in control tobacco. By ELISA analysis, the average expression of Cry1Ac protein in transgenic tobacco was 150.441 ng/g,. The average expression level of Cry1Ac protein was 1 192.592 ng/g, at 0.861.201.74 ng/g;Cry3A. The average expression level of Cry1Ac protein was 23.33102413.47 ng/g.. The insect resistance of transgenic plants was preliminarily proved by the insect test of Spodoptera litura. The salt tolerance test of tissue culture seedlings showed that the differentiation status of transgenic lines was better than that of control under different salt concentrations. It was proved that one-time transformation of insect-resistant polygenes could improve the insect resistance and salt tolerance of tobacco.
【作者單位】： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院;廊坊市農(nóng)林科學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31370663) 國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2013AA102703)共同資助
【分類號(hào)】：S572;Q943.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2213583