【摘要】：印記基因是一類親本來源特異性表達的基因,大部分印記基因在胚胎發(fā)育、胎盤形成以及個體生活過程中扮演著重要角色。P57是周期蛋白激酶抑制劑,是一個典型的抑癌基因,同時也是一個父本印記、母本表達的印記基因,其缺失會帶來胚胎致死。P57免疫熒光染色顯示其蛋白在乳腺組織中廣泛表達,RT-PCR結果表明它在乳腺形態(tài)變化的4個時期中表達量呈下降趨勢。為了研究P57在乳腺發(fā)育過程中是否起到了作用,本文在乳腺細胞中設計了兩種shRNA的對P57進行了敲除,發(fā)現P57通過影響乳腺上皮細胞的干性來影響增殖,RT結果顯示其干細胞信號通路的相關基因表達水平明顯降低,然而周期檢測發(fā)現其G1期的細胞比例下降。通過對臨近LncRNA Kcnq1ot1進行敲除可以使P57的表達量顯著上調,但對PRC2復合物成員Suz12敲除雖然可以降低Kcnq1ot1的表達,但P57的變化趨勢卻不穩(wěn)定。在對P57進行敲除后,RT檢測到另外15個印記基因的表達水平也發(fā)生顯著變化,驗證了乳腺細胞中印記基因網絡的存在。
[Abstract]:Imprinted genes are a class of genes specifically expressed by their parents. Most imprinted genes play an important role in embryonic development, placenta formation and individual life. P57 is a cyclin kinase inhibitor and a typical tumor suppressor gene. It's also a paternal imprint, the imprinted gene expressed by the mother. The results of RT-PCR showed that the expression of P57 protein decreased in the four stages of mammary gland morphological changes. In order to study whether P57 plays a role in breast development, we designed two kinds of shRNA to knock out P57 in mammary gland cells. It was found that P57 affected the proliferation of mammary epithelial cells by affecting the dryness of mammary epithelial cells. The results showed that the expression level of genes related to stem cell signaling pathway was significantly decreased, but the proportion of cells in G1 phase was decreased by cycle detection. The expression of P57 could be upregulated significantly by knockout of adjacent LncRNA Kcnq1ot1, but Suz12 knockout of PRC2 complex member could decrease the expression of Kcnq1ot1, but the change trend of P57 was not stable. The expression level of the other 15 imprinted genes was also significantly changed by RT after p57 knockout, which confirmed the existence of imprinted gene network in breast cells.
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q78

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本文編號：2213319